Антитела IgG к вирусу гепатита C (Hepatitis C virus) методом иммуноблоттинга в крови

Качественное определение антител класса IgG к вирусу гепатита C (anti-HCV) методом иммуноблоттинга в сыворотке крови применяется как подтверждающий тест после положительного или сомнительного результата скринингового исследования на anti-HCV. Скрининг обладает высокой чувствительностью, однако его специфичность не абсолютна, тест может давать ложноположительные результаты. Иммуноблоттинг решает эту проблему за счёт того, что выявляет антитела к отдельным антигенам вируса гепатита C, а не к их смеси. Такой подход позволяет отличить истинный антительный ответ, направленный сразу на несколько вирусных белков, от ложноположительной реактивности. Вирус гепатита C (HCV) содержит набор структурных и неструктурных белков. К первым относится нуклеокапсидный core-белок, формирующий сердцевину вириона; ко вторым — NS3, NS4 и NS5, участвующие в репликации и сборке вирусных частиц. Каждый из них способен вызывать независимый гуморальный ответ. Иммуноблоттинг регистрирует присутствие IgG к этим белкам по отдельности. Результат считают положительным при реактивности с белками двух и более участков вирусного генома; при реактивности с единственным антигеном или слабом сигнале его расценивают как неопределённый и требуют дополнительного обследования. Именно прицельная регистрация спектра антительной реактивности и отличает подтверждающий тест от скрининга. 
Антитела класса IgG к вирусу гепатита C появляются в крови через 8–12 недель после инфицирования и сохраняются пожизненно и у пациентов с текущей хронической инфекцией, и после клинического выздоровления или успешной противовирусной терапии. По этой причине положительный результат иммуноблоттинга подтверждает инфицирование пациента возбудителем, но не разграничивает активную и перенесённую инфекцию; для решения этой задачи применяется определение РНК HCV молекулярно-генетическими методами (ПЦР).

Вирус гепатита C (Hepatitis C virus, HCV) относится к семейству Flaviviridae, роду Hepacivirus. Известно 6 (по расширенной классификации до 8) генотипов и большое число субтипов возбудителя, различающихся по географическому распространению, клиническому течению и чувствительности к противовирусной терапии; в Российской Федерации преобладают генотипы 1 (главным образом 1b), 3 (главным образом 3a) и 2. Выраженная изменчивость возбудителя в пределах одного хозяина за счёт ошибок репликации позволяет HCV уклоняться от иммунного контроля и обеспечивает развитие хронической инфекции у большинства инфицированных.

Заражение происходит почти исключительно парентеральным путём при прямом контакте с инфицированной кровью. В современных условиях ведущим путём передачи служит инъекционное употребление наркотиков с использованием общих шприцев и инструментария. К другим парентеральным механизмам передачи относятся медицинские и стоматологические манипуляции при нарушении правил асептики и антисептики, гемотрансфузии и трансплантация органов до начала 1990-х годов (до внедрения универсального скрининга донорской крови), татуировка, пирсинг, маникюр и педикюр нестерильным инструментарием, бытовой контакт с предметами личной гигиены инфицированного лица. Половой путь передачи имеет ограниченное эпидемиологическое значение для гетеросексуальных моногамных пар, однако значимо возрастает при множественных половых партнёрах, незащищённых половых контактах с травматизацией слизистых, сопутствующей ВИЧ-инфекции. Вертикальная передача от инфицированной матери ребёнку происходит с частотой 5–10% и значимо возрастает при сопутствующей ВИЧ-инфекции у матери. К группам повышенного риска инфицирования HCV относятся потребители инъекционных наркотиков, пациенты программ гемодиализа, медицинские работники с риском парентеральных экспозиций, ВИЧ-инфицированные лица и дети, рождённые от HCV-инфицированных матерей.

Клинические формы гепатита C включают острый и хронический гепатит. Острый гепатит C развивается через 2–24 недели (в среднем 6–8 недель) после инфицирования и в 70–80% случаев протекает бессимптомно или с минимальными клиническими проявлениями. У 20–30% пациентов в острой фазе появляются общая слабость, утомляемость, снижение аппетита, тошнота, дискомфорт в правом подреберье, артралгии, реже — желтуха, потемнение мочи, обесцвечивание кала, повышение активности печёночных трансаминаз и общего билирубина. Спонтанная элиминация возбудителя происходит у 15–30% инфицированных лиц в течение шести месяцев от заражения; у 70–85% пациентов острая инфекция переходит в хроническую форму. Хронический гепатит C развивается при сохранении РНК HCV в крови более шести месяцев после заражения и протекает преимущественно бессимптомно в течение 10–30 лет и более. Длительная нелеченая HCV-инфекция приводит к прогрессирующему фиброзу печени с развитием цирроза (у 15–30% пациентов с хроническим гепатитом C в течение 20–30 лет), декомпенсации цирроза с печёночной недостаточностью и портальной гипертензией, гепатоцеллюлярной карциноме. Вирус гепатита C признан установленным канцерогеном для человека и относится к ведущим причинам гепатоцеллюлярного рака в мире. После элиминации возбудителя в результате спонтанной реконвалесценции или успешной противовирусной терапии у большинства пациентов наблюдается стабилизация или регресс фиброза печени, однако риск гепатоцеллюлярной карциномы у пациентов с уже сформировавшимся циррозом сохраняется и требует продолжения регулярного онкологического наблюдения.

Клиническое значение

Положительный иммуноблот сам по себе не разграничивает текущую инфекцию и перенесённое заболевание. Для этого одновременно или вслед за ним назначают определение РНК HCV методом ПЦР. Если РНК не обнаружена, а иммуноблот положителен, диагностируют перенесённую инфекцию со спонтанной или достигнутой лечением элиминацией вируса. Если же при отрицательной ПЦР иммуноблот оказывается отрицательным или неопределённым, первоначальный результат скрининга расценивают как ложноположительный. Такое разграничение важно для эпидемиологического анамнеза, оценки риска повторного заражения и окончательного заключения о HCV-статусе пациента.

В особых клинических группах — у доноров крови, тканей и органов, пациентов программ гемодиализа, медицинских работников с парентеральными экспозициями, ВИЧ-инфицированных лиц, реципиентов трансплантации, новорождённых от инфицированных матерей с положительным результатом материнского anti-HCV — иммуноблоттинг применяется для подтверждения положительного результата скринингового исследования в комплексной оценке HCV-статуса наряду с определением РНК HCV. У ВИЧ-инфицированных пациентов и при тяжёлом иммунодефиците выработка антител к вирусу гепатита C может быть отсроченной, ослабленной или отсутствовать, и отрицательный результат иммуноблоттинга не исключает HCV-инфекцию; в этих ситуациях основным методом диагностики служит определение РНК HCV.

После курса противовирусной терапии гепатита C контроль эффективности лечения проводится определением РНК HCV молекулярно-генетическими методами через 12 и 24 недели после завершения терапии (показатель устойчивого вирусологического ответа). Результат иммуноблоттинга после успешного лечения остаётся положительным пожизненно за счёт сохранения IgG к возбудителю и не служит критерием эффективности терапии или элиминации возбудителя.

Ограничения

Иммуноблоттинг для определения IgG к вирусу гепатита C может давать ложноположительные результаты при аутоиммунных заболеваниях (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, аутоиммунный гепатит) за счёт неспецифической поликлональной активации иммунного ответа, при гипергаммаглобулинемии и при наличии в сыворотке гетерофильных антител. Возможны также результаты с реактивностью к одному антигену, не достигающие критерия положительного результата, но интерпретируемые как неопределённый (сомнительный) результат и требующие повторного исследования с определением РНК HCV для окончательного заключения. 
В первые 8–12 недель после инфицирования (период серологического окна) иммуноблоттинг может быть отрицательным из-за отсутствия достаточной выработки антител; повторное исследование рекомендуется через 1–2 месяца, а при высоком эпидемиологическом риске одновременно проводится определение РНК HCV молекулярно-генетическими методами для выявления вирусемии в острой фазе до сероконверсии.