ПЦР типирование ВПЧ 35 и 45 типа в урогенитальном соскобе

Анализ выявляет ДНК вируса папилломы человека (ВПЧ) двух генотипов высокого канцерогенного риска — 35 и 45 — в соскобе со слизистой урогенитального тракта методом ПЦР с раздельной идентификацией каждого типа. Результат выдаётся раздельно по каждому генотипу в формате обнаружено / не обнаружено. Биоматериал — соскоб со слизистой урогенитального тракта: у женщин соскоб из цервикального канала или с поверхности шейки матки (зоны трансформации), у мужчин — соскоб из уретры.

ВПЧ — обширная группа ДНК-содержащих вирусов, поражающих эпителий кожи и слизистых оболочек. Из более чем двухсот известных генотипов клинически значимая часть делится на две группы по их онкогенному потенциалу. Генотипы высокого канцерогенного риска связаны с развитием рака шейки матки, анального рака, рака других локализаций аногенитальной области и рака ротоглотки. Генотипы низкого риска вызывают доброкачественные пролиферативные поражения — аногенитальные кондиломы. 
ВПЧ 35 и ВПЧ 45 относятся к группе генотипов высокого канцерогенного риска с установленным онкогенным потенциалом и входят в первый список международных классификаций канцерогенов (IARC, группа 1). При этом два типа имеют разное филогенетическое родство и несколько различающиеся клинические профили. 

• ВПЧ 35 принадлежит к видовой группе Alpha-9 рода Alphapapillomavirus — той же группе, к которой относятся ВПЧ 16, 31, 33, 52, 58. Эта видовая группа объединяет родственные онкогенные типы со сходным клиническим поведением. 
• ВПЧ 45 относится к видовой группе Alpha-7 рода Alphapapillomavirus — той же группе, к которой относится ВПЧ 18. Это филогенетическое родство клинически значимо: ВПЧ 45, как и ВПЧ 18, чаще встречается в ассоциации с аденокарциномой шейки матки — гистологическим вариантом рака, отличающимся от более распространённого плоскоклеточного рака. Аденокарциномы развиваются из железистого эпителия эндоцервикса и нередко труднее выявляются стандартной цитологией, что повышает значимость молекулярной диагностики связанных с ними типов ВПЧ. 

ВПЧ 35 встречается в широком спектре цервикальных предраковых изменений. ВПЧ 45 после ВПЧ 18 — один из значимых типов в этиологии цервикальных аденокарцином, хотя в общей структуре ВПЧ-ассоциированной патологии шейки матки встречается реже, чем ВПЧ 16 и ВПЧ 18.

Узкая видоспецифическая панель из двух генотипов применяется в специфических ситуациях, когда требуется раздельное выявление именно этих типов ВПЧ. Это может быть клиническое наблюдение пациенток с ранее установленной инфекцией, вызванной ВПЧ 35 или ВПЧ 45; обследование в рамках расширенной этиологической оценки у пациенток с предраковыми изменениями шейки матки или с подозрением на железистую патологию эндоцервикса, когда требуется уточнение конкретного генотипа; научно-клинические задачи.

Для рутинного цервикального скрининга узкая двухгенотипная панель самостоятельным инструментом не является. Стандартный скрининг рака шейки матки строится на тесте, охватывающем все четырнадцать генотипов высокого риска, либо на тесте с раздельным выявлением ВПЧ 16, 18 и суммарно остальных типов высокого риска. Тестирование только на ВПЧ 35 и 45 без оценки других онкогенных типов даёт неполную картину онкогенного риска и используется как дополнение к комплексной диагностике, а не как её замена.

Метод ПЦР выявляет генотипоспецифические участки генома ВПЧ 35 и ВПЧ 45, обеспечивая их раздельную идентификацию. Метод не зависит от жизнеспособности вируса и обладает высокой аналитической чувствительностью при низком содержании вирусной ДНК в пробе.

Клиническое значение

Тест применяется в специфических ситуациях, когда требуется раздельное выявление именно ВПЧ 35 и ВПЧ 45. Это может быть наблюдение пациенток с ранее установленной инфекцией, вызванной этими генотипами, для оценки её сохранения во времени; уточняющее исследование при положительном результате скрининга на группу высокого риска, когда лечащий врач считает важным выявить конкретный генотип; обследование пациенток с предраковыми изменениями шейки матки или с подозрением на железистую патологию эндоцервикса в рамках расширенной этиологической оценки, в которой выявление ВПЧ 45 имеет особое значение в связи с его ассоциацией с аденокарциномой.

Положительный результат на ВПЧ 35 или ВПЧ 45 подтверждает присутствие соответствующего генотипа высокого риска в пробе. Это указывает на онкогенный потенциал инфекции, сопоставимый по клиническому весу с обнаружением других генотипов установленного высокого риска. Обнаружение ВПЧ 45 у пациентки с подозрением на железистую патологию эндоцервикса может иметь дополнительный клинический вес в связи с известной ассоциацией этого генотипа с аденокарциномой шейки матки. Тактика после положительного результата определяется лечащим врачом с учётом клинической картины, результатов цитологического и кольпоскопического обследования, общего онкогенного риска у пациентки. Сам по себе положительный результат не равнозначен диагнозу предраковых изменений или рака шейки матки: установление этих диагнозов требует морфологического исследования биопсийного материала.

Отрицательный результат на оба генотипа снижает вероятность участия именно ВПЧ 35 и ВПЧ 45 в клинической картине, но не исключает других генотипов высокого риска, не входящих в эту узкую панель. Если требуется оценить общий онкогенный риск, связанный с инфекцией ВПЧ высокого риска, выполняется тест на полную группу четырнадцати онкогенных генотипов.

Ограничения

Метод ПЦР выявляет ДНК возбудителя и не говорит о его жизнеспособности. Тест охватывает только два генотипа — ВПЧ 35 и ВПЧ 45 — и не выявляет другие генотипы высокого риска (16, 18, 31, 33, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68), а также генотипы низкого риска. Узкая двухгенотипная панель не используется как самостоятельный инструмент цервикального скрининга: для оценки общего онкогенного риска применяется тест, охватывающий все четырнадцать генотипов высокого риска. Молекулярное обнаружение ВПЧ 35 или ВПЧ 45 само по себе не равнозначно диагнозу предраковых изменений или рака шейки матки: установление этих диагнозов требует морфологического исследования биопсийного материала. Положительный результат — фактор для индивидуальной оценки врачом, не самостоятельный диагноз. Качественный формат теста не даёт количественной оценки содержания вирусной ДНК в пробе. Качество забора материала имеет существенное значение: у женщин адекватный соскоб должен включать клетки из зоны трансформации шейки матки; неоптимальный забор снижает чувствительность исследования. Применение теста у мужчин ограничено: стандартизованного скрининга ВПЧ-инфекции у мужчин в международной практике не сложилось, а тестирование партнёров инфицированных женщин в современных рекомендациях не предусмотрено. Результат исследования требует интерпретации врачом — гинекологом, дерматовенерологом, онкологом — с учётом клинической картины, результатов цитологического и кольпоскопического исследования у женщин, общей ситуации.