ПЦР типирование ВПЧ 16-59 типов при исследовании в рамках жидкостной цитологии, количественное исследование

Папилломавирусы высокого канцерогенного риска (типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59) являются эпителиотропными ДНК-вирусами, которые проникают в базальные клетки многослойного эпителия через микроповреждения слизистой. Наиболее уязвима зона перехода цилиндрического эпителия в многослойный плоский на шейке матки: здесь идёт активное деление клеток, и именно этот участок служит основной точкой приложения инфекции. У большинства инфицированных вирус удаляется силами клеточного иммунитета в течение одного-двух лет, и обнаруженная ДНК отражает временный, самостоятельно разрешающийся процесс. Если элиминация не происходит, длительно сохраняющаяся инфекция сопровождается устойчивой экспрессией вирусных белков E6 и E7, которые связывают и инактивируют белки p53 и pRb. Контроль клеточного цикла и апоптоза нарушается, генетические повреждения накапливаются, развиваются дисплазия эпителия и, при многолетней персистенции, рак шейки матки. Количество вирусной ДНК и набор выявленных типов зависят от того, реплицируется ли вирус в поверхностных слоях эпителия, сохраняется ли он годами в трансформированных клетках или речь идёт о недавнем контакте с несколькими типами одновременно. Исследование выполняется в клеточной суспензии из шейки матки, стабилизированной консервирующей жидкостью, то есть в той же пробе, что используется для жидкостной цитологии: морфологическая картина и вирусологический результат относятся к одной популяции клеток.

Выявление ДНК вирусов высокого риска положено в основу цервикального скрининга, поскольку опережает морфологические изменения: вирус определяется задолго до появления атипичных клеток, а отрицательный результат у женщины старше 30 лет соответствует низкой вероятности предраковых изменений на несколько лет вперёд. Ключевую информацию даёт типирование. Типы 16 и 18 связаны примерно с 70% случаев рака шейки матки и с наибольшей частотой тяжёлой дисплазии, поэтому их обнаружение считается основанием для направления на кольпоскопию даже при нормальной цитологии, тогда как другие типы высокого риска при неизменённом эпителии допускают наблюдение с повторным обследованием. Количественный формат отделяет следовые количества вирусной ДНК от клинически значимой концентрации и делает результаты сопоставимыми при повторных исследованиях; при этом уровень нагрузки оценивается вместе с типом вируса и данными цитологического заключения, а самостоятельным критерием тяжести поражения он не служит. Совмещение типирования и жидкостной цитологии в одной пробе позволяет получить оба результата без повторного забора материала и сразу соотнести обнаруженный генотип с состоянием эпителия.

Вторая устойчивая задача исследования состоит в уточнении тактики при неопределённых цитологических заключениях. При картине ASC-US или лёгкой дисплазии обнаружение вируса высокого риска указывает на необходимость углублённого обследования, а его отсутствие относит пациентку к группе низкого риска с возвратом к обычному интервалу наблюдения. Типоспецифичный результат важен и после лечения дисплазии: сохранение того же генотипа, который выявлялся до вмешательства, говорит о персистенции инфекции и остаточном риске рецидива, тогда как появление нового типа указывает на повторное инфицирование. Контрольное обследование после конизации или петлевой эксцизии обычно проводится через полгода и учитывается при выборе дальнейшей тактики наблюдения. У женщин до 30 лет распространённость временной инфекции высока, и положительный результат чаще отражает транзиторный процесс, поэтому в этой возрастной группе он оценивается осторожнее и сопоставляется с цитологией. У вакцинированных снижается частота выявления типов, включённых в вакцину, при сохранении возможности инфицирования остальными генотипами панели, что поддерживает значение типирования и в этой группе.