ПЦР-диагностика РНК вируса краснухи в отделяемом рото-носоглотки

Определение РНК вируса краснухи в отделяемом ротоносоглотки методом ПЦР — молекулярно-биологическое исследование, выявляющее генетический материал вируса краснухи в мазке или соскобе со слизистой оболочки носоглотки и ротоглотки. Вирус краснухи — РНК-содержащий вирус семейства Matonaviridae, рода Rubivirus, имеющий единственный антигенный тип. Человек является единственным природным хозяином вируса. Краснуха передаётся воздушно-капельным путём через назофарингеальные секреты, и именно слизистая оболочка верхних дыхательных путей служит входными воротами инфекции и основным местом первичной репликации вируса. Заражённый человек наиболее заразен в период появления сыпи, но может быть контагиозен за 7 дней до и в течение 7 дней после появления высыпаний. Инкубационный период составляет в среднем 17 дней (от 12 до 23 дней).

У детей и взрослых краснуха, как правило, протекает нетяжело: невысокая лихорадка, недомогание, лимфаденопатия (характерно увеличение заднешейных и заушных лимфоузлов), кратковременная пятнисто-папулёзная сыпь. У взрослых, особенно у женщин, нередко присоединяются артралгии и артриты. Существенно, что от 25 до 50% случаев краснухи протекают бессимптомно. Многие заболевания, сопровождающиеся сыпью, клинически неотличимы от краснухи, поэтому клинический диагноз считается ненадёжным и требует лабораторного подтверждения. Принципиальная опасность краснухи связана с заражением во время беременности: инфицирование в первом триместре может приводить к выкидышу, мертворождению и синдрому врождённой краснухи (СВК) — тяжёлому комплексу пороков развития, включающему катаракту, врождённые пороки сердца и нейросенсорную глухоту. Благодаря массовой вакцинации (MMR) в развитых странах краснуха стала редким заболеванием, однако вспышки продолжают регистрироваться в регионах с неполным охватом вакцинацией, а завоз инфекции возможен при международных поездках.

Носоглотка является основным местом репликации вируса краснухи и оптимальным источником биоматериала для прямого обнаружения возбудителя. Вирус обнаруживается в назофарингеальных секретах за несколько дней до появления сыпи и продолжает выделяться в течение 1–2 недель после неё. У новорождённых с врождённой краснухой вирус выделяется через носоглотку особенно обильно и длительно — до года и более. Мазок из ротоносоглотки является предпочтительным биоматериалом для ПЦР-диагностики краснухи согласно рекомендациям CDC и ВОЗ, наряду с мочой; кровь используется как дополнительный материал. Метод ПЦР обнаруживает непосредственно РНК вируса — прямое свидетельство его присутствия и активной репликации.

Клиническое значение

Определение РНК вируса краснухи в отделяемом ротоносоглотки методом ПЦР применяется для прямого подтверждения инфекции и дополняет серологическую диагностику (IgM, IgG) в ситуациях, когда серологические результаты неоднозначны, когда необходимо молекулярное типирование вируса или когда требуется обнаружение вируса в материале из первичного очага репликации. IgM к краснухе может давать ложноположительные результаты (перекрёстные реакции с другими вирусами, ревматоидный фактор), а на ранних сроках инфекции — быть отрицательным. Обнаружение РНК вируса в носоглоточном отделяемом подтверждает активную инфекцию вне зависимости от серологического статуса и позволяет провести молекулярное типирование: отличить дикий вирус от вакцинного штамма (что важно при высыпаниях после вакцинации MMR), определить генотип для эпидемиологического расследования и установить связь между случаями в рамках вспышки.

Носоглоточный мазок особенно информативен при обследовании контактных лиц и в рамках эпидемиологического надзора. При расследовании вспышек и обследовании лиц, контактировавших с больным краснухой, определение РНК в мазке из ротоносоглотки позволяет выявить инфицированных ещё до появления сыпи (когда вирус уже активно реплицируется в носоглотке) и идентифицировать бессимптомных носителей, которые составляют до половины всех случаев инфекции. Это имеет критическое значение для защиты беременных: если среди контактных оказывается беременная женщина без иммунитета, раннее лабораторное подтверждение краснухи у источника определяет тактику наблюдения и профилактики. Обследование контактных беременных также может включать ПЦР из ротоносоглотки наряду с серологией и исследованием крови.

Диагностика врождённой краснухи у новорождённых — ещё одна ключевая область. Мазок из носоглотки является одним из предпочтительных биоматериалов для подтверждения врождённой инфекции наряду с мочой. Дети с врождённой краснухой выделяют вирус через носоглотку обильно и длительно, представляя эпидемиологическую опасность для окружающих, особенно для неиммунных беременных. Согласно рекомендациям CDC, ребёнок с врождённой краснухой считается потенциально заразным до тех пор, пока два последовательных образца, взятых с интервалом не менее месяца, не окажутся отрицательными при ПЦР-исследовании.

Таким образом, ПЦР отделяемого ротоносоглотки наиболее информативна для подтверждения активной краснухи при сомнительных серологических результатах, при обследовании контактных лиц и расследовании вспышек, для молекулярного типирования и дифференциации дикого вируса от вакцинного штамма, а также для диагностики и мониторинга контагиозности при врождённой краснухе. Для оценки иммунитета (перенесённая инфекция, поствакцинальный иммунитет) используется серологический метод (IgG), а не ПЦР.

Ограничения

Стандартным методом диагностики постнатальной краснухи остаётся серология (IgM, IgG, авидность IgG). ПЦР из ротоносоглотки дополняет серологию в описанных выше ситуациях, но не заменяет её в рутинной практике. 
Отрицательный результат не исключает краснуху. Выделение вируса через носоглотку может прекратиться к моменту обследования, особенно если забор материала выполнен на поздних сроках (более 2 недель после появления сыпи). При сохраняющемся подозрении рекомендуется серологическое обследование и, при необходимости, ПЦР из дополнительных биоматериалов (моча, кровь). 
Исследование определяет наличие или отсутствие РНК, но не измеряет вирусную нагрузку. 
Результат исследования требует интерпретации врачом с учётом серологических данных, клинической картины, эпидемиологического анамнеза, вакцинального статуса и, при обследовании беременных, срока гестации.