ПЦР-диагностика РНК вируса краснухи в крови

Определение РНК вируса краснухи (Rubella virus) в крови методом ПЦР, качественное исследование — молекулярно-биологический тест, выявляющий генетический материал вируса краснухи в сыворотке или плазме крови. Вирус краснухи — РНК-содержащий вирус семейства Matonaviridae, рода Rubivirus, имеющий единственный антигенный тип. Человек является единственным природным хозяином вируса. Краснуха передаётся воздушно-капельным путём через назофарингеальные секреты; заражённый человек наиболее заразен в период появления сыпи, но может быть контагиозен за 7 дней до и в течение 7 дней после появления высыпаний. Инкубационный период составляет в среднем 17 дней (от 12 до 23 дней).

У детей и взрослых краснуха, как правило, протекает нетяжело: невысокая лихорадка, недомогание, лимфаденопатия (характерно увеличение заднешейных и заушных лимфоузлов), кратковременная пятнисто-папулёзная сыпь, начинающаяся с лица и распространяющаяся по телу. У взрослых, особенно у женщин, нередко присоединяются артралгии и артриты. Существенно, что от 25 до 50% случаев краснухи протекают бессимптомно — заражённый человек не знает о своей инфекции, но остаётся источником заражения для окружающих. Многие заболевания, сопровождающиеся сыпью, клинически неотличимы от краснухи, поэтому клинический диагноз считается ненадёжным и требует лабораторного подтверждения.

Принципиальная опасность краснухи связана не с постнатальной инфекцией, а с заражением во время беременности. Инфицирование беременной женщины, особенно в первом триместре, может приводить к выкидышу, мертворождению и синдрому врождённой краснухи (СВК) — тяжёлому комплексу пороков развития, включающему катаракту и другие поражения глаз, врождённые пороки сердца (чаще всего открытый артериальный проток), нейросенсорную глухоту, а также микроцефалию, задержку развития, гепатоспленомегалию и тромбоцитопению. Риск СВК максимален при заражении в первые 12 недель гестации. По данным ВОЗ, ежегодно в мире рождается около 100 000 детей с синдромом врождённой краснухи. Благодаря массовой вакцинации (MMR — корь, паротит, краснуха) в развитых странах краснуха стала редким заболеванием, однако в регионах с неполным охватом вакцинацией вспышки продолжают регистрироваться, а завоз инфекции возможен при международных поездках.

Метод ПЦР с обратной транскрипцией (RT-PCR) обнаруживает непосредственно РНК вируса в крови — прямое свидетельство виремии и текущей инфекции. Стандартным методом диагностики постнатальной краснухи является серология (IgM и IgG), однако ПЦР предоставляет дополнительные возможности, особенно в ситуациях, когда серологические результаты неоднозначны, и играет ключевую роль в пренатальной диагностике врождённой инфекции.

Клиническое значение

Определение РНК вируса краснухи методом ПЦР применяется в ситуациях, где серологическая диагностика недостаточна или требует дополнения прямым обнаружением вируса. Стандартная диагностика постнатальной краснухи основывается на выявлении IgM-антител или четырёхкратного нарастания титра IgG в парных сыворотках, однако IgM к краснухе может давать ложноположительные результаты (перекрёстные реакции с другими вирусами, наличие ревматоидного фактора), а также может быть отрицательным на ранних сроках инфекции. Обнаружение РНК вируса методом ПЦР подтверждает активную инфекцию независимо от серологического профиля и особенно ценно при сомнительных результатах IgM, при обследовании в первые дни заболевания до формирования антительного ответа, а также при необходимости молекулярного типирования для эпидемиологических целей — в частности, для дифференциации дикого вируса и вакцинного штамма.

Наиболее значимая область применения — обследование беременных при контакте с краснухой или подозрении на инфекцию. Если беременная женщина, не имеющая документированного иммунитета, контактировала с больным или у неё появилась сыпь, необходимо лабораторное подтверждение или исключение инфекции. При неоднозначных серологических данных обнаружение РНК вируса в крови подтверждает виремию и текущую инфекцию, что имеет прямые последствия для тактики ведения беременности: при подтверждённой инфекции в первом триместре необходимо информирование пациентки о рисках СВК и обсуждение дальнейшей тактики. Бессимптомная краснуха у беременной (а это до 50% случаев) также может приводить к СВК, поэтому лабораторное подтверждение при контакте важно даже при отсутствии симптомов. При подтверждённой или подозреваемой краснухе у беременной ПЦР может быть выполнена в амниотической жидкости, фетальной крови или ворсинах хориона для определения, произошло ли внутриутробное инфицирование плода; определение РНК в крови матери подтверждает факт материнской виремии, что является предпосылкой для вертикальной передачи.

ПЦР играет важную роль и в диагностике врождённой краснухи у новорождённого: обнаружение РНК вируса подтверждает инфекцию, определяет необходимость изоляции (дети с врождённой краснухой выделяют вирус в большом количестве до года и более) и длительного наблюдения для раннего выявления неврологических и офтальмологических осложнений. Оптимальные биоматериалы для ПЦР у новорождённого — мазок из носоглотки и моча; кровь может использоваться как дополнительный биоматериал. Помимо диагностической функции, молекулярное типирование вируса на основе данных ПЦР применяется в эпидемиологическом надзоре: оно позволяет установить источник и пути распространения инфекции, подтвердить или опровергнуть связь между случаями в рамках вспышки. В редких случаях вирус краснухи может вызывать персистирующую инфекцию у лиц с первичными иммунодефицитами, проявляющуюся гранулёмами кожи и внутренних органов, увеитом Фукса или хроническим энцефалитом — у таких пациентов серологические маркёры могут быть неинформативны, и ПЦР становится основным методом подтверждения диагноза.

Ограничения

Стандартным методом диагностики постнатальной краснухи остаётся серология (IgM, IgG, авидность IgG). ПЦР дополняет серологию в описанных выше ситуациях, но не заменяет её в рутинной практике. 
Исследование качественное — определяет наличие или отсутствие РНК, но не измеряет вирусную нагрузку. 
Отрицательный результат не исключает краснуху. Виремия при постнатальной краснухе транзиторна и может завершиться к моменту обследования. При сохраняющемся клиническом подозрении рекомендуется серологическое подтверждение и, при необходимости, ПЦР из дополнительных биоматериалов (мазок из носоглотки, моча). 
Оценка иммунитета к краснухе (перенесённая инфекция, поствакцинальный иммунитет) проводится серологическим методом (IgG), а не ПЦР. ПЦР выявляет текущую инфекцию, но не оценивает иммунный статус. 
Результат исследования требует интерпретации врачом с учётом серологических данных (IgM, IgG, авидность IgG), клинической картины, эпидемиологического анамнеза, срока беременности (при обследовании беременных) и вакцинального статуса.