ПЦР-диагностика вируса гепатита C (HCV) в крови, ультрачувствительный тест

Определение РНК вируса гепатита C (Hepatitis C virus) в крови методом ПЦР, ультрачувствительное качественное исследование — молекулярно-биологический тест, который выявляет генетический материал вируса гепатита С в сыворотке крови с аналитической чувствительностью 15 МЕ/мл и специфичностью 100%. Метод позволяет качественно определить присутствие РНК вируса гепатита С субтипов 1a, 1b, 2a, 2b, 2c, 2i, 3, 4. Термин «ультрачувствительный» отражает принципиальное отличие от тест-систем предыдущего поколения, которые имели порог обнаружения 50 МЕ/мл и выше: снижение порога до 15 МЕ/мл позволяет выявлять минимальные количества вируса, недоступные для обнаружения стандартными методами, что клинически значимо при оценке эффективности лечения.

Согласно клиническим рекомендациям МЗ РФ по диагностике и лечению вирусного гепатита С, при выявлении антител к вирусу и решении вопроса о проведении лечения необходимо определить РНК HCV методами с чувствительностью не более 25 МЕ/мл. Рекомендации Европейской ассоциации по изучению печени (EASL) для оценки устойчивого вирусологического ответа устанавливают ещё более строгий порог — не более 15 МЕ/мл. Данный тест соответствует обоим требованиям.

Вирус гепатита С — РНК-содержащий вирус семейства Flaviviridae, передающийся преимущественно через кровь. Острая инфекция в 70–80% случаев протекает бессимптомно; у 55–85% заражённых развивается хроническая инфекция (определяемая как выявление РНК HCV в крови на протяжении более шести месяцев), которая может десятилетиями протекать без явных симптомов, постепенно приводя у части пациентов (15–30%) к циррозу печени и повышению риска гепатоцеллюлярной карциномы. Гепатит С не всегда требует лечения: у части людей инфекция прекращается самопроизвольно благодаря иммунной реакции, а у части пациентов с хронической инфекцией существенного повреждения печени не происходит. Однако при наличии показаний современные препараты прямого противовирусного действия (ПППД, DAA) обеспечивают устойчивый вирусологический ответ (эрадикацию вируса) более чем у 95% пациентов при курсе 8–12 недель.

В острую фазу гепатита РНК вируса выявляется в крови уже через 1–2 недели после заражения — задолго до появления антител. Если в крови выявляются антитела к вирусу, но РНК обнаружить не удаётся, оснований для диагноза «хронический гепатит С» недостаточно — это может свидетельствовать о перенесённой инфекции с самостоятельным клиренсом или об успешном лечении в прошлом.

Клиническое значение

Ультрачувствительное качественное определение РНК HCV — высокоточный инструмент, который применяется на ключевых этапах диагностики и ведения пациента с гепатитом С. Чувствительность 15 МЕ/мл соответствует наиболее строгим международным требованиям и обеспечивает надёжность результата в ситуациях, где цена ошибки — пропуск остаточной виремии или ложноотрицательный результат — особенно высока.

Подтверждение устойчивого вирусологического ответа после лечения — основная область применения. УВО12 (неопределяемая РНК HCV через 12 недель после завершения курса ПППД) расценивается как излечение и является главным ориентиром оценки эффективности терапии. Для подтверждения УВО12 необходим тест с чувствительностью ≤15 МЕ/мл — именно этот порог рекомендован EASL. Неопределяемый результат при таком пороге с высокой надёжностью исключает остаточную виремию и позволяет врачу констатировать эрадикацию вируса. Если же РНК обнаруживается через 12 недель после завершения курса, это свидетельствует о рецидиве и является основанием для рассмотрения альтернативной схемы терапии. Рецидивы после современных ПППД крайне редки, но наиболее вероятны у пациентов с генотипом 3 в сочетании с циррозом, при исходно высокой вирусной нагрузке и при повторном курсе после неудачи первого лечения — именно у этих пациентов ультрачувствительный тест особенно востребован.

Подтверждение активной инфекции при скрининге. При выявлении антител к вирусу гепатита С (anti-HCV) следующим шагом является определение РНК для подтверждения текущей инфекции. Ультрачувствительный тест с порогом 15 МЕ/мл подходит как для этой задачи, так и для последующей оценки УВО12 — одна методология на всех этапах ведения пациента, что упрощает логистику и обеспечивает сопоставимость результатов.

Диагностика в серонегативный период и при иммунодефиците. При остром гепатите С РНК вируса может быть выявлена ещё до появления антител — ультрачувствительный тест повышает надёжность диагностики в этот период. У лиц с ВИЧ-инфекцией, реципиентов трансплантатов, пациентов на гемодиализе и иммуносупрессивной терапии антитела к вирусу могут не вырабатываться или вырабатываться с задержкой. Определение РНК ультрачувствительным методом целесообразно у пациентов с заболеваниями печени неуточнённой этиологии и у лиц с приобретённым иммунодефицитом — даже при отрицательном результате исследования антител. Именно у иммунокомпрометированных пациентов чувствительность теста имеет особое значение: вирусная кинетика у них может отличаться, а виремия — находиться на низком уровне.

Обследование новорождённых от HCV-инфицированных матерей. Материнские антитела anti-HCV циркулируют у ребёнка до 18 месяцев, делая серологическое тестирование неинформативным. Определение РНК — основной лабораторный метод ранней диагностики перинатальной инфекции, и ультрачувствительный тест повышает надёжность этой оценки, поскольку виремия у новорождённых может быть на низком уровне.

Выявление реинфекции после успешного лечения. У лиц с продолжающимся рисковым поведением (инъекционное употребление наркотиков, незащищённые половые контакты в группах высокого риска) после достижения УВО возможна реинфекция новым штаммом. Антитела anti-HCV остаются положительными пожизненно и не меняются при повторном заражении — определение РНК остаётся основным способом обнаружить новый эпизод инфекции. Ультрачувствительный метод позволяет выявить реинфекцию на самом раннем этапе, при минимальных концентрациях вируса, что даёт возможность своевременно начать повторный курс терапии.

Дифференциальная диагностика острого гепатита. При клинической картине острого поражения печени (повышение аминотрансфераз, желтуха, диспепсия), когда маркёры гепатитов А и В отрицательны, а anti-HCV ещё не определяются, обнаружение РНК HCV устанавливает этиологию. Ультрачувствительный тест обеспечивает максимальную надёжность диагностики в этой клинической ситуации.

Ограничения

Исследование не предназначено для скрининга вирусного гепатита С. Для скрининга используется определение антител (anti-HCV); при положительных антителах исследование РНК подтверждает активную инфекцию. 
Исследование качественное — определяет наличие или отсутствие РНК, но не измеряет вирусную нагрузку. Для количественной оценки виремии (исходный уровень перед терапией, мониторинг динамики) необходимо количественное определение РНК HCV. 
Исследование не определяет генотип вируса. Для выбора схемы терапии в ряде клинических ситуаций необходимо отдельное генотипирование HCV. 
Результат исследования требует интерпретации врачом с учётом серологических данных, терапевтического анамнеза и клинического контекста