ПЦР-диагностика вируса герпеса 8 типа (HHV8) в крови

Это исследование позволяет определить, присутствует ли в крови ДНК вируса герпеса 8 типа — возбудителя, связанного с развитием саркомы Капоши и ряда редких лимфопролиферативных заболеваний. Результат выдаётся в формате «обнаружено» или «не обнаружено».
Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) обнаруживает ДНК вируса непосредственно в цельной крови. В отличие от серологических методов, которые выявляют антитела и свидетельствуют лишь о факте контакта с вирусом, ПЦР выявляет ДНК HHV-8 в крови. Это принципиально, поскольку антитела к HHV-8 обнаруживаются у многих людей, которые никогда не заболевают. Положительная серология сама по себе не указывает на активную инфекцию и не обосновывает клинических решений.
Вирус герпеса человека 8 типа (HHV-8), также известный как герпесвирус, ассоциированный с саркомой Капоши (KSHV), поражает преимущественно B-лимфоциты и эндотелиальные клетки. Вирус передаётся через слюну, половым путём, при трансплантации органов и переливании крови. После заражения HHV-8 устанавливает пожизненную латентную инфекцию. У большинства инфицированных вирус остаётся клинически «молчащим» на протяжении всей жизни и не причиняет вреда здоровью. Риск развития заболеваний значительно возрастает при ослаблении иммунитета, однако некоторые формы саркомы Капоши описаны и у лиц без выраженного иммунодефицита.
HHV-8 является доказанной причиной трёх групп заболеваний. Саркома Капоши — сосудистая опухоль, поражающая кожу, слизистые оболочки и внутренние органы; это СПИД-индикаторное заболевание. Первичная выпотная лимфома (PEL) — агрессивная опухоль, проявляющаяся выпотами в плевральную, перикардиальную или брюшную полость. Мультицентрическая болезнь Кастлемана (MCD) — лимфопролиферативное заболевание с лихорадкой, генерализованным увеличением лимфоузлов и увеличением печени и селезёнки. Все три состояния наиболее часто встречаются у людей, живущих с ВИЧ-инфекцией.

Клиническое значение

Тест назначается при подозрении на заболевание, вызванное HHV-8, или для оценки активности уже установленной инфекции. Исследование не является скрининговым и не предназначено для обследования бессимптомных лиц — оно информативно только в определённых клинических ситуациях, где обнаружение вируса в крови меняет диагностическую или лечебную тактику.

Наибольшую клиническую ценность тест имеет при мультицентрической болезни Кастлемана. При этом заболевании виремия напрямую отражает активность процесса: обострения с лихорадкой, цитопениями и полиорганной дисфункцией сопровождаются нарастанием вируса в крови, а ремиссия — его снижением. Благодаря этой корреляции ПЦР крови используется не только для подтверждения диагноза, но и для мониторинга течения болезни и оценки вирусологического ответа на лечение. Качественный формат фиксирует факт виремии; для отслеживания динамики в числовом выражении может потребоваться количественное исследование.

При саркоме Капоши роль ПЦР крови иная. У людей, живущих с ВИЧ-инфекцией, виремия HHV-8 ассоциирована с повышенным риском развития саркомы и может предшествовать появлению кожных элементов, нарастая по мере углубления иммунодефицита. Однако связь между виремией и саркомой Капоши носит вероятностный характер: у значительной части пациентов с гистологически подтверждённой опухолью ДНК вируса в крови не определяется. Чувствительность теста зависит от стадии заболевания, распространённости поражений и характеристик тест-системы. По этой причине отрицательный результат ПЦР крови не исключает саркому Капоши и не снимает необходимости биопсии при наличии подозрительных кожных или висцеральных элементов.

Отдельную группу составляют реципиенты трансплантатов, у которых медикаментозная иммуносупрессия создаёт условия как для реактивации собственной латентной инфекции, так и для первичного инфицирования от донора. Посттрансплантационная саркома Капоши и связанные с HHV-8 лимфопролиферативные осложнения могут развиваться в течение месяцев или лет после трансплантации. Выявление виремии у таких пациентов, особенно в сочетании с клиническими признаками — необъяснимой лихорадкой, увеличением лимфоузлов, цитопениями или появлением подозрительных кожных элементов, — обосновывает целенаправленный диагностический поиск и может служить аргументом для пересмотра иммуносупрессивной схемы. Как и при ВИЧ-ассоциированной саркоме, отрицательный результат ПЦР не исключает HHV-8-ассоциированного заболевания.

Первичная выпотная лимфома — наиболее редкое и агрессивное из HHV-8-ассоциированных заболеваний. Виремия при PEL, как правило, определяется на момент диагноза, однако основным диагностическим материалом является выпотная жидкость или биоптат. ПЦР крови может поддержать клиническое подозрение, но для подтверждения диагноза необходимо цитологическое и иммуногистохимическое исследование.

Во всех перечисленных ситуациях диагноз устанавливается на основании биопсии с гистологическим и иммуногистохимическим исследованием. ПЦР крови играет вспомогательную роль: подтверждает наличие ДНК HHV-8 в крови, документирует виремию и применяется для контроля ответа на лечение. Для серологической оценки инфицированности HHV-8 существуют отдельные тесты на антитела, однако их стандартизация уступает серологическим методам для других герпесвирусов, и результаты требуют осторожной интерпретации. Рутинный скрининг бессимптомных лиц с помощью ПЦР крови не рекомендован.

Ограничения метода

Отрицательный результат не исключает инфицирование HHV-8. Вирус может персистировать латентно в B-лимфоцитах без определяемой виремии, а у значительной части пациентов с гистологически подтверждённой саркомой Капоши ДНК вируса в крови не выявляется.
Положительный результат подтверждает присутствие вирусной ДНК, но не позволяет установить конкретный диагноз и не разграничивает активную репликацию и циркуляцию латентно инфицированных клеток. Качественный формат не определяет вирусную нагрузку — для динамического мониторинга может потребоваться количественное исследование. Диагноз во всех случаях устанавливается на основании биопсии.
Исследование выявляет вирус только в крови и не даёт информации о наличии HHV-8 в тканях. Для диагностики поражений конкретных локализаций необходимы биопсия с иммуногистохимическим окрашиванием на LANA или ПЦР соответствующего биоматериала. Присутствие в образце ингибиторов ПЦР (гепарин при заборе в неправильную пробирку, выраженный гемолиз) может привести к ложноотрицательному результату.
Результат ПЦР следует интерпретировать совместно с клинической картиной, иммунным статусом и данными гистологического исследования. Интерпретацию проводит лечащий врач (инфекционист, онколог, гематолог, дерматовенеролог, трансплантолог