Определение ДНК вируса Эпштейна-Барр (Epstein - Barr virus), методом ПЦР в крови, качественное исследование

Исследование направлено на обнаружение вируса Эпштейна-Барр в крови. Тест выявляет наличие или отсутствие вирусной ДНК в материале и не оценивает её количество. Методом ПЦР вирусная ДНК определяется в образце крови. Вирус Эпштейна-Барр в крови находится преимущественно внутри инфицированных B-лимфоцитов; небольшая часть вирусной ДНК циркулирует во внеклеточной фракции. Кровь — один из основных биоматериалов для исследования на вирус Эпштейна-Барр в ситуациях, когда необходимо подтвердить его присутствие в организме на молекулярном уровне, а не только по антителам. Качественный формат теста отвечает на принципиальный вопрос: есть ли вирусная ДНК в крови на момент исследования. Он не измеряет её количество и не позволяет судить о динамике инфекции, для чего используется количественная ПЦР. 
Серологические методы (определение антител к капсидному антигену VCA, раннему антигену EA, ядерному антигену EBNA) остаются основным инструментом диагностики ВЭБ-инфекции: они устанавливают факт инфицирования, отличают первичную инфекцию от перенесённой и определяют стадию иммунного ответа. Качественная ПЦР крови отвечает на другой вопрос — присутствует ли вирусная ДНК в крови в данный момент, что особенно важно в ситуациях, когда серологические данные затруднены в интерпретации или недостаточны для клинических решений.

Вирус Эпштейна-Барр (EBV, HHV-4) — гамма-герпесвирус, повсеместно распространённый в человеческой популяции: к подростковому и молодому взрослому возрасту антитела к вирусу выявляются практически у всех людей. При первичном заражении вирус размножается в эпителии ротоглотки и слюнных желёз, затем инфицирует B-лимфоциты, в которых устанавливает пожизненную латентную инфекцию. У здоровых людей вирус контролируется T-клеточным иммунитетом, и его циркуляция в крови обычно не определяется или выявляется в очень низких количествах. При снижении иммунитета или при активной фазе инфекции количество вирусной ДНК в крови возрастает, и вероятность её обнаружения повышается.

Клиническое значение

Качественная ПЦР крови на вирус Эпштейна-Барр не является стандартным тестом при типичном течении инфекционного мононуклеоза. При классической клинической картине (лихорадка, фарингит, увеличение шейных лимфоузлов, общая слабость, лимфоцитоз с атипичными мононуклеарами в общем анализе крови) диагноз подтверждается серологически. Однако в ряде ситуаций исследование имеет обоснованную клиническую ценность.

Атипичное или нетипичное течение мононуклеозоподобного синдрома. При стёртой клинической картине, при длительной лихорадке неясного происхождения, при лимфаденопатии без характерных серологических изменений обнаружение ДНК вируса в крови может поддержать предположение об активной инфекции, особенно если серологическая картина неоднозначна. Это касается ранней стадии инфекции, когда антительный ответ ещё не сформировался, и ситуаций, когда иммунный ответ нарушен.

Обследование пациентов с иммунодефицитом. У реципиентов трансплантатов, у людей с ВИЧ-инфекцией, у пациентов на иммуноподавляющей или биологической терапии серологические реакции могут быть ослаблены или запаздывать, и диагностика инфекций требует дополнительных методов. Качественная ПЦР крови в этих группах может быть использована для подтверждения присутствия вируса, однако для полноценного мониторинга риска посттрансплантационных лимфопролиферативных заболеваний применяется количественная ПЦР крови с оценкой динамики нагрузки. Качественный формат в этом контексте имеет ограниченное значение.

Подтверждение активной инфекции при атипичных серологических профилях. У части пациентов серологические маркёры могут давать противоречивые или трудно интерпретируемые результаты — например, отсутствие IgM при положительных IgG к VCA и отсутствующих IgG к EBNA, или замедленное появление IgG к EBNA после перенесённого мононуклеоза. В этих случаях обнаружение ДНК вируса в крови помогает склонить диагностический поиск в сторону активной инфекции.

Обследование при неспецифических системных симптомах. У пациентов с длительной лихорадкой, слабостью, лимфаденопатией и другими системными проявлениями, при которых вирус Эпштейна-Барр рассматривается среди возможных причин, качественная ПЦР крови может быть частью расширенного обследования. Результат интерпретируется с учётом клинической картины и других лабораторных данных.

При ВЭБ-ассоциированных лимфопролиферативных и онкологических заболеваниях — посттрансплантационных лимфопролиферативных заболеваниях, лимфоме Беркитта, части B-клеточных и T/NK-клеточных лимфом, назофарингеальной карциноме — основным инструментом лабораторного наблюдения является количественная ПЦР крови. Качественный формат в этих ситуациях применяется реже, так как не позволяет оценивать динамику и судить об эффективности терапии.

Рутинное обследование здоровых людей с помощью качественной ПЦР крови на вирус Эпштейна-Барр не показано. У большинства взрослого населения вирус присутствует в организме в латентном состоянии, и результат исследования в отсутствие клинических показаний диагностически не информативен.

Ограничения метода

Качественный формат не измеряет количество вирусной ДНК. Положительный результат подтверждает присутствие вируса в крови, но не позволяет отличить низкоуровневое вирусовыделение от клинически значимой активной инфекции. Для решения этой задачи применяется количественная ПЦР, позволяющая оценивать уровень вирусной нагрузки и его изменение в динамике. 
Выбор между разными вариантами биоматериала (цельная кровь, плазма, сыворотка) влияет на чувствительность теста: вирусная ДНК находится преимущественно внутри клеток, и материалы, содержащие клеточную фракцию, обеспечивают более высокую чувствительность. При наблюдении за пациентом в динамике рекомендуется использовать один и тот же тип биоматериала и одну и ту же лабораторию, поскольку смена материала или метода делает сравнение результатов ненадёжным. 
Отрицательный результат не полностью исключает ВЭБ-ассоциированного заболевания. Часть заболеваний, связанных с вирусом, может протекать при низкой или неопределяемой вирусной нагрузке в крови. При сохраняющемся клиническом подозрении могут потребоваться повторное исследование или дополнительные методы диагностики — серология, гистологическое исследование биоптата, иммуногистохимия с определением вируса в тканях. 
Положительный результат требует клинической интерпретации. Он подтверждает присутствие вируса, но сам по себе не устанавливает причинной связи с конкретным заболеванием. Диагноз ВЭБ-ассоциированных лимфопролиферативных и онкологических заболеваний подтверждается гистологическим и иммуногистохимическим исследованиями. 
Приём противовирусных препаратов (ганцикловир, ацикловир) и иммунотерапия (ритуксимаб, ВЭБ-специфические цитотоксические T-лимфоциты) влияют на количество вирусной ДНК в крови и на вероятность её обнаружения. Интерпретация результата на фоне терапии требует учёта времени забора относительно введения препаратов. 
Заключение формулирует лечащий врач (инфекционист, гематолог, педиатр, терапевт) с учётом клинической картины, серологического статуса, общего анализа крови, данных инструментальных обследований и, при необходимости, результатов дополнительных молекулярных и гистологических исследований