ПЦР-диагностика парвовируса B19 в ротоглотке

Определение ДНК парвовируса B19 в мазках со слизистой оболочки ротоглотки методом ПЦР — молекулярно-биологическое исследование, выявляющее генетический материал парвовируса В19 в соскобе эпителиальных клеток ротоглотки. Парвовирус В19 — мелкий безоболочечный ДНК-содержащий вирус семейства Parvoviridae, наиболее клинически значимый патоген человека в этом семействе. Основной путь передачи инфекции — воздушно-капельный: вирус выделяется через секреты верхних дыхательных путей в период виремии, когда больной наиболее заразен, но клинические проявления ещё неспецифичны или отсутствуют. Вирус также передаётся контактным путём (через контаминированные предметы), вертикально (от матери к плоду) и через компоненты крови. Отсутствие липидной оболочки делает парвовирус одним из наиболее устойчивых во внешней среде вирусов.

Основным биоматериалом для ПЦР-диагностики парвовирусной инфекции является кровь (сыворотка), поскольку вирус обладает тропизмом к клеткам-предшественникам эритроцитов и виремия достигает очень высоких уровней в острой фазе. Стандартом подтверждения острой инфекции у иммунокомпетентных пациентов остаётся серология (IgM, IgG) в сочетании с ПЦР крови. Мазок из ротоглотки является дополнительным неинвазивным биоматериалом, в котором ДНК парвовируса может обнаруживаться в виремической фазе заболевания. Преимущество ротоглоточного мазка — простота и безболезненность забора, что особенно важно в педиатрической практике: парвовирусная инфекция наиболее распространена среди детей дошкольного и младшего школьного возраста, и забор мазка из ротоглотки значительно комфортнее для ребёнка, чем венепункция.

Парвовирусная инфекция характеризуется двухфазностью. Первая фаза (5–10 дней после заражения) — виремия с присутствием вируса в назофарингеальных секретах; симптомы неспецифичны (лихорадка, недомогание) или отсутствуют; пациент наиболее заразен. Вторая фаза (примерно через две недели после заражения) проявляется характерной сыпью на лице («синдром пощёчины» у детей) или артропатией (преимущественно у взрослых женщин). К моменту появления этих типичных симптомов виремия, как правило, уже прекращается, и ПЦР крови может быть отрицательной. У здоровых детей инфекционная эритема протекает легко, однако у лиц с хроническими гемолитическими анемиями (серповидноклеточная анемия, наследственный сфероцитоз, талассемия) вирус может провоцировать транзиторный апластический криз; у пациентов с ослабленным иммунитетом — хроническую инфекцию с персистирующей анемией; у беременных — вертикальную передачу с риском фетальной анемии, неиммунной водянки плода и внутриутробной гибели при заражении в первые 20 недель гестации.

Клиническое значение

Определение ДНК парвовируса В19 в мазке из ротоглотки методом ПЦР применяется как дополнительный неинвазивный диагностический инструмент, прежде всего у детей, в ситуациях, когда забор крови затруднён или нецелесообразен.

Основная область применения — дифференциальная диагностика экзантемных заболеваний у детей. Диагноз инфекционной эритемы нередко ставится клинически по характерной сыпи, однако множество других заболеваний — краснуха, корь, энтеровирусные экзантемы — имеют сходные проявления. При необходимости лабораторного подтверждения мазок из ротоглотки обеспечивает возможность неинвазивной верификации без венепункции, что особенно актуально при обследовании маленьких детей. Исследование также востребовано при эпидемиологических расследованиях вспышек в детских коллективах (детские сады, школы), когда необходимо обследовать большое количество детей и массовый забор крови нецелесообразен.

Вместе с тем необходимо учитывать, что мазок из ротоглотки не заменяет исследование крови и серологию. У беременных, пациентов с ослабленным иммунитетом (хроническая парвовирусная инфекция с парциальной красноклеточной аплазией) и при транзиторном апластическом кризе у лиц с хроническими гемолитическими анемиями диагностика строится на исследовании крови — ПЦР сыворотки и серология (IgM, IgG), — и ротоглоточный мазок не заменяет этот подход. У иммунокомпетентных пациентов с клиническими проявлениями (сыпь, артропатия) стандартом подтверждения диагноза остаётся серология, поскольку к моменту появления симптомов антитела IgM, как правило, уже определяются.

Таким образом, исследование мазка из ротоглотки на ДНК парвовируса В19 наиболее информативно как неинвазивный дополнительный метод в педиатрической практике, при дифференциальной диагностике экзантемных заболеваний у детей и при эпидемиологических расследованиях вспышек. Для диагностики у беременных, пациентов с ослабленным иммунитетом, при апластическом кризе и для полноценной серологической оценки приоритетным биоматериалом остаётся кровь.

Ограничения

Мазок из ротоглотки является дополнительным, а не основным биоматериалом для диагностики парвовирусной инфекции. Чувствительность ПЦР из ротоглоточного мазка может быть ниже, чем ПЦР сыворотки крови; присутствие и концентрация ДНК вируса в ротоглотке зависят от фазы заболевания и индивидуальных особенностей. 
Отрицательный результат не исключает парвовирусную инфекцию. При сохраняющемся клиническом подозрении рекомендуется серологическое обследование (IgM, IgG) и, при необходимости, ПЦР крови. 
Положительный результат не позволяет оценить тяжесть инфекции и не заменяет исследование крови при необходимости определения серологических маркёров, вирусной нагрузки или мониторинга терапии. 
Исследование определяет наличие или отсутствие ДНК, но не измеряет вирусную нагрузку. ПЦР выявляет ДНК вируса, а не подтверждённую инфекционность — результат не используется для оценки контагиозности или принятия решений об изоляции. 
Результат исследования требует интерпретации врачом с учётом клинической картины, возраста пациента, эпидемиологического анамнеза, иммунного и гематологического статуса, а при обследовании беременных — данных серологии крови и ультразвукового мониторинга плода.