ПЦР-диагностика парвовируса B19 в слюне

Определение ДНК парвовируса B19 в слюне методом ПЦР — молекулярно-биологическое исследование, выявляющее генетический материал парвовируса В19 в образце слюны. Парвовирус В19 — мелкий безоболочечный ДНК-содержащий вирус семейства Parvoviridae, наиболее клинически значимый патоген человека в этом семействе. Вирус обладает избирательным тропизмом к клеткам-предшественникам эритроцитов в костном мозге, однако во время острой инфекции в виремической фазе обнаруживается также в носоглотке, слюне, различных тканях и биологических жидкостях. Именно присутствие вируса в секретах верхних дыхательных путей обеспечивает основной (воздушно-капельный) путь передачи инфекции.

Слюна — неинвазивный и легкодоступный биоматериал, что особенно важно в педиатрической практике: парвовирусная инфекция наиболее распространена среди детей дошкольного и младшего школьного возраста, и забор слюны значительно проще и комфортнее для ребёнка, чем венепункция. Основным биоматериалом для ПЦР-диагностики парвовирусной инфекции считается кровь (сыворотка), поскольку вирус обладает тропизмом к клеткам-предшественникам эритроцитов и виремия достигает очень высоких уровней (до 10¹² частиц/мл) в острой фазе. Тем не менее ДНК парвовируса В19 обнаруживается и в секретах ротоглотки, и исследование слюны занимает свою клиническую нишу.

Ключевая особенность парвовирусной инфекции — двухфазность. Первая фаза (5–10 дней после заражения) характеризуется виремией и присутствием вируса в носоглоточных секретах; именно в эту фазу пациент наиболее заразен, но клинические симптомы ещё неспецифичны (лихорадка, недомогание, симптомы ОРВИ) или отсутствуют вовсе. Вторая фаза (примерно через две недели после заражения) проявляется характерной сыпью («синдром пощёчины» у детей) или артропатией (у взрослых, преимущественно у женщин), однако к этому моменту виремия, как правило, уже прекращается, и ПЦР крови может быть отрицательной. При этом в слюне и мазке из ротоглотки ДНК парвовируса может сохраняться дольше, чем в крови, — и в период появления клинических симптомов содержаться в большей концентрации, чем в сыворотке. Это делает слюну потенциально более информативным биоматериалом именно на стадии клинических проявлений — когда пациент обращается к врачу.

У здоровых детей парвовирусная инфекция протекает легко (инфекционная эритема, «пятая болезнь»), однако у лиц с хроническими гемолитическими анемиями (серповидноклеточная анемия, наследственный сфероцитоз, талассемия) вирус может провоцировать транзиторный апластический криз; у пациентов с ослабленным иммунитетом — хроническую инфекцию с персистирующей анемией; у беременных — вертикальную передачу с риском фетальной анемии, неиммунной водянки плода и внутриутробной гибели (при заражении в первые 20 недель гестации).

Клиническое значение

Определение ДНК парвовируса В19 в слюне методом ПЦР применяется прежде всего как неинвазивный диагностический инструмент у детей, а также в ситуациях, когда забор крови затруднён или нецелесообразен. Диагноз инфекционной эритемы у здоровых детей обычно ставится клинически по характерной сыпи, однако при необходимости лабораторного подтверждения (дифференциальная диагностика с краснухой, корью и другими экзантемными заболеваниями) исследование слюны предоставляет возможность неинвазивной верификации диагноза без венепункции. Это особенно актуально в детских коллективах (детские сады, школы), где вспышки парвовирусной инфекции нередки, и при эпидемиологических расследованиях, когда необходимо обследовать большое количество детей.

Дополнительное преимущество слюны как биоматериала проявляется именно во второй (клинической) фазе заболевания, когда пациент обращается к врачу с сыпью или артропатией. В этот период виремия в крови, как правило, уже завершена, и ПЦР сыворотки может дать отрицательный результат, тогда как ДНК вируса в слюне ещё сохраняется. Таким образом, исследование слюны может расширить диагностическое окно ПЦР за пределы виремической фазы. При этом следует учитывать, что основным биоматериалом для лабораторной диагностики парвовирусной инфекции остаётся кровь: именно в сыворотке определяются как ДНК вируса (ПЦР), так и специфические антитела (IgM, IgG), что обеспечивает наиболее полную диагностическую оценку. У пациентов с ослабленным иммунитетом, при апластическом кризе и у беременных диагностика строится на исследовании крови (ПЦР и серология), и слюна не заменяет этот подход, но может использоваться как дополнительный биоматериал.

Таким образом, исследование слюны на ДНК парвовируса В19 наиболее информативно в педиатрической практике как неинвазивный метод подтверждения инфекции, при дифференциальной диагностике экзантемных заболеваний у детей, при эпидемиологических расследованиях вспышек, а также во второй фазе заболевания, когда ПЦР крови может быть уже отрицательной. Для диагностики у беременных, пациентов с ослабленным иммунитетом и при апластическом кризе приоритетным биоматериалом остаётся кровь (сыворотка).

Ограничения

Отрицательный результат не исключает парвовирусную инфекцию. Выделение ДНК вируса в слюну может быть кратковременным и непостоянным; концентрация вируса в слюне зависит от фазы заболевания и индивидуальных особенностей. 
Положительный результат не позволяет оценить тяжесть инфекции и не заменяет исследование крови при необходимости определения вирусной нагрузки, серологических маркёров (IgM, IgG) или мониторинга терапии. 
Исследование определяет наличие или отсутствие ДНК, но не измеряет вирусную нагрузку. 
Низкоуровневая ДНК парвовируса В19 может персистировать в тканях после перенесённой инфекции. Положительный результат ПЦР слюны интерпретируется в совокупности с клинической картиной и, при необходимости, серологическими данными. 
Результат исследования требует интерпретации врачом с учётом клинической картины, возраста пациента, эпидемиологического анамнеза, иммунного и гематологического статуса, а при обследовании беременных — данных серологии и ультразвукового мониторинга плода.