ПЦР-диагностика листерии(Listeria monocytogenes) в соскобе носоглотки

Определение ДНК Listeria monocytogenes в соскобе эпителиальных клеток слизистой носа методом ПЦР выявляет листерию в слизистой оболочке носа. Тест не относится к стандартным методам диагностики листериоза и может рассматриваться только как вспомогательный тест в отдельных нестандартных клинических ситуациях и не заменяет бактериологическое исследование крови, ликвора и других клинически значимых материалов.

Listeria monocytogenes — грамположительная факультативно-анаэробная палочка, внутриклеточный патоген с уникальной способностью проникать в клетки хозяина и распространяться от клетки к клетке, минуя внеклеточное пространство. Этот механизм позволяет возбудителю преодолевать кишечный эпителий, гематоэнцефалический барьер и плацентарный барьер, что определяет три наиболее опасные формы заболевания: нейролистериоз, септицемию и перинатальный листериоз. Листерия обладает природной устойчивостью к цефалоспоринам — группе антибиотиков, составляющей основу эмпирической терапии многих бактериальных инфекций. Это делает быструю этиологическую верификацию клинически значимой: при листериозной инфекции стандартная эмпирическая терапия цефалоспоринами неэффективна, и требуется назначение препаратов пенициллинового ряда. 
Основной путь заражения — алиментарный. Листерия широко распространена в природе и способна размножаться при температуре бытового холодильника (+2…+4 °C), что делает её опасным контаминантом пищевых продуктов длительного хранения: непастеризованных молочных продуктов, мягких сыров, готовых мясных и рыбных изделий, немытых овощей. Помимо пищевого, описан воздушно-пылевой путь передачи, актуальный прежде всего для лиц, профессионально контактирующих с животными и обрабатывающих животноводческое сырьё: при работе с инфицированными тканями, околоплодными водами и плацентарным материалом животных возбудитель может попадать на кожу и слизистые оболочки верхних дыхательных путей. Вертикальный путь — от матери к плоду через плаценту или при прохождении через родовые пути — определяет перинатальную форму заболевания. 
Листериоз — редкое заболевание (заболеваемость в Европе около 0,5–0,7 на 100 000 населения в год), однако летальность при инвазивных формах достигает 20–30%. Заболевание развивается преимущественно у лиц из групп риска: беременных (заболеваемость примерно в 12 раз выше общепопуляционной), новорождённых, пожилых старше 65 лет, пациентов с иммунодефицитными состояниями (ВИЧ-инфекция, трансплантация, химиотерапия, иммуносупрессивная терапия, онкологические заболевания, сахарный диабет). У иммунокомпетентных взрослых листерия чаще вызывает самоограничивающийся гастроэнтерит. Бессимптомное кишечное носительство описано у 1–5% здоровых лиц; при профессиональном контакте с животными частота носительства может быть выше.

Среди клинических форм листериоза выделяют гастроэнтеритическую (неинвазивную), нейролистериоз (менингит, менингоэнцефалит, ромбэнцефалит), септицемию, перинатальную инфекцию и ангинозно-септическую форму. Последняя форма представляет наибольший интерес в контексте данного биоматериала: ангинозно-септический листериоз проявляется поражением ротоглотки и миндалин (листериозная ангина), сопровождается лихорадкой, увеличением регионарных лимфоузлов и может протекать с бактериемией. При этой форме возбудитель обнаруживается на слизистых оболочках верхних дыхательных путей, что объясняет информативность носоглоточного мазка именно в данном клиническом контексте.

Клиническое значение

ПЦР-определение ДНК листерии в соскобе слизистой носа информативно в нескольких конкретных клинических ситуациях, каждая из которых связана с присутствием возбудителя именно в верхних дыхательных путях. При подозрении на ангинозно-септическую форму листериоза обнаружение ДНК листерии в носоглоточном мазке подтверждает присутствие возбудителя в очаге поражения. Эта форма проявляется лихорадкой, болью в горле, увеличением миндалин и шейных лимфоузлов и клинически может напоминать стрептококковую ангину, инфекционный мононуклеоз или дифтерию. ПЦР в этой ситуации позволяет быстро (за 1–2 дня, в отличие от 5–7 дней для посева) идентифицировать листерию и обосновать смену эмпирической антибактериальной терапии: стандартные цефалоспорины при листериозной этиологии неэффективны из-за природной устойчивости возбудителя, и требуется назначение препаратов пенициллинового ряда. Именно быстрое этиологическое подтверждение обеспечивает прямое терапевтическое следствие результата.

При оценке профессиональной экспозиции тест может подтвердить присутствие листерии на слизистых оболочках верхних дыхательных путей у лиц, контактирующих с потенциально инфицированным животноводческим материалом. Работники ферм, скотобоен, мясо- и молокоперерабатывающих предприятий подвергаются воздушно-пылевой экспозиции, при которой листерия попадает на кожу и слизистые. Обнаружение ДНК листерии в носоглоточном мазке у такого работника при наличии лихорадки неясного генеза, лимфаденопатии или клиники ангины ориентирует на листериозную этиологию и обосновывает дальнейшее обследование (посев крови, серология). В эпидемиологическом контексте (расследование вспышек на предприятиях) результат имеет вспомогательное значение для оценки масштаба экспозиции.

Обнаружение ДНК листерии в носоглоточном мазке у бессимптомного лица без клинической картины инфекции не является основанием для диагноза листериоза и не требует автоматического назначения антибактериальной терапии. Транзиторное присутствие возбудителя на слизистых оболочках может отражать экспозицию без развития инвазивного процесса. Решение о необходимости лечения принимается врачом на основании совокупности клинических данных.

ПЦР носоглоточного соскоба на листерию наиболее информативен при клинике ангинозно-септического листериоза (лихорадка, поражение миндалин, лимфаденопатия), при обследовании лиц из профессиональных групп риска с симптомами инфекции и как компонент эпидемиологического обследования при вспышках. Для диагностики нейролистериоза, септицемии и перинатальной инфекции стандартными биоматериалами остаются кровь и ликвор.

Ограничения

Обнаружение ДНК Listeria monocytogenes в носоглоточном соскобе подтверждает присутствие генетического материала возбудителя на слизистой, но не является доказательством инвазивного листериоза. Листерия может транзиторно присутствовать на слизистых при контакте с контаминированной средой без развития системной инфекции. Положительный результат не заменяет посев крови и ликвора, которые остаются стандартом подтверждения инвазивных форм. 
Отрицательный результат не исключает листериоз. При инвазивных формах (менингит, сепсис, перинатальная инфекция) возбудитель локализуется в крови, ликворе и плаценте и может не определяться в носоглоточном мазке. Результат характеризует только исследованный биоматериал. 
ПЦР определяет ДНК возбудителя независимо от его жизнеспособности; после антибактериальной терапии остаточная ДНК может детектироваться и приводить к ложноположительным результатам. Тест не определяет серотип и не предоставляет данных об антибиотикочувствительности; при необходимости эти параметры определяются культуральным методом. 
Результат исследования требует интерпретации врачом с учётом клинической картины, эпидемиологического анамнеза (профессиональный контакт, пищевая экспозиция), принадлежности к группам риска, данных посева крови и ликвора и других лабораторных показателей.