ПЦР-диагностика листерии (Listeria monocytogenes) в кале, амниотической жидкости

Анализ выявляет ДНК Listeria monocytogenes — возбудителя листериоза — в амниотической жидкости или кале методом ПЦР. Биоматериал — амниотическая жидкость или кал, в зависимости от клинической задачи. Результат выдаётся в формате обнаружено / не обнаружено.

Listeria monocytogenes — грамположительная палочка, способная сохраняться и размножаться в условиях холодильного хранения, что отличает её от большинства других пищевых патогенов. Заражение человека происходит через пищевые продукты — мягкие сыры из непастеризованного молока, готовые мясные изделия, рыбу холодного копчения, готовые салаты, недостаточно обработанные термически продукты. У большинства здоровых людей листериоз протекает как самоограничивающаяся пищевая инфекция или вообще бессимптомно. Клинически значимые формы развиваются в группах повышенного риска — у беременных, новорождённых, пожилых, пациентов с иммуносупрессией, онкологических пациентов, реципиентов трансплантатов. 
Базовая лабораторная диагностика инвазивного листериоза — бактериологическое исследование крови, ликвора и других стерильных материалов с выделением возбудителя в культуре и определением чувствительности к антибактериальным препаратам. ПЦР не заменяет культуральный метод и применяется в специфических ситуациях, когда культуральное исследование малочувствительно или клинически нецелесообразно.

Амниотическая жидкость — основной биоматериал ПЦР-диагностики листериоза в акушерской практике. Беременная сама обычно переносит инфекцию относительно легко (как лихорадочное состояние, гриппоподобный эпизод, иногда без симптомов), но возбудитель проникает через плаценту и поражает плод. Последствия для плода тяжёлые: внутриутробная инфекция, ранняя или поздняя смерть плода, преждевременные роды, неонатальный листериоз с менингитом и сепсисом. 
Амниоцентез выполняется по строгим клиническим показаниям при подозрении на внутриутробное инфицирование — у беременной с лихорадкой неясного генеза в третьем триместре, при признаках хориоамнионита, при нарушениях сердцебиения плода или других признаках возможной внутриутробной инфекции. Положительный результат ПЦР амниотической жидкости прямо подтверждает инвазию возбудителя в околоплодные воды. Тест имеет высокую специфичность: листерии в амниотической жидкости в норме отсутствуют, и обнаружение их ДНК — клинически значимая находка, служащая основанием для немедленного начала антибактериальной терапии и решения о тактике ведения беременности. Параллельно выполняется культуральное исследование крови матери; ведение пациентки определяется акушером-гинекологом совместно с инфекционистом и неонатологом. 
Отрицательный результат у беременной с подозрением на внутриутробный листериоз снижает вероятность инфекции, но не исключает её абсолютно: возбудитель может ещё не достигнуть амниотической жидкости в выявляемых количествах. При сохраняющемся клиническом подозрении тактика определяется по совокупности клинических данных и результатов культурального исследования крови матери и других биоматериалов.

Кал — вспомогательный, не основной материал для диагностики листериоза. Здоровое носительство L. monocytogenes в кишечнике встречается в популяции, и обнаружение возбудителя в кале у клинически здорового человека не равнозначно диагнозу инфекции. ACOG и другие международные клинические рекомендации не предусматривают тестирования (включая исследование крови и кала) у беременных после бессимптомного пищевого контакта с возможно контаминированной едой; при появлении клинической симптоматики ключевым материалом для подтверждения инвазивной инфекции остаётся кровь. 
Применение ПЦР кала имеет ограниченную клиническую нишу — преимущественно эпидемиологическую: расследование вспышек листериоза, изучение источников инфекции, оценка состояния носительства в исследовательских и эпидемиологических задачах. ПЦР кала не используется для подтверждения или исключения инвазивных форм листериоза — септицемии, менингита, неонатального листериоза, — для диагностики которых исследуются стерильные биоматериалы (кровь, ликвор, ткани).

ПЦР выявляет специфические участки генома L. monocytogenes — обычно ген hlyA, кодирующий листериолизин O, или другие видоспецифические мишени. Метод не зависит от жизнеспособности возбудителя и сохраняет чувствительность при низком его содержании в пробе. Тест направлен только на L. monocytogenes — клинически значимый для человека вид рода Listeria; другие виды (L. ivanovii, L. innocua и более редкие) не выявляются.

Клиническое значение

ПЦР амниотической жидкости применяется при подозрении на внутриутробный листериоз в ситуациях, требующих прямого подтверждения возбудителя в околоплодных водах: у беременной с лихорадкой неясного генеза в третьем триместре, при признаках хориоамнионита, при изменениях со стороны плода, заставляющих заподозрить внутриутробную инфекцию. Положительный результат имеет высокую клиническую весомость и служит основанием для немедленного начала терапии. Тактика определяется акушером-гинекологом совместно с инфекционистом и неонатологом. Исследование выполняется только при наличии показаний к амниоцентезу — инвазивной процедуре с собственными рисками для беременности.

ПЦР кала используется в ограниченных задачах — преимущественно эпидемиологических: при расследовании вспышек листериоза, при изучении источников инфекции и состояния носительства. Тест не применяется для подтверждения инвазивных форм инфекции и не используется как скрининг у беременных после возможного пищевого контакта при отсутствии клинической симптоматики. У пациента с симптомами желудочно-кишечного характера обнаружение L. monocytogenes в кале может поддерживать листериозную этиологию, но интерпретация требует учёта клинической картины и принадлежности к группе риска; обнаружение возбудителя у клинически здорового человека рассматривается как возможное носительство.

Ограничения

Метод ПЦР выявляет ДНК возбудителя и не говорит о его жизнеспособности. Тест направлен только на L. monocytogenes; другие виды рода Listeria не выявляются. ПЦР амниотической жидкости выполняется только при наличии клинических показаний к амниоцентезу. Отрицательный результат не исключает внутриутробного листериоза абсолютно: возбудитель может ещё не достигнуть амниотической жидкости в выявляемых количествах, и тактика при сохраняющемся клиническом подозрении определяется по совокупности данных. Обнаружение L. monocytogenes в кале у пациента без симптомов не равнозначно диагнозу инфекции — возможно бессимптомное носительство возбудителя в кишечнике. ПЦР кала не используется как инструмент диагностики или исключения инвазивного листериоза. На чувствительность метода влияет предшествующая антибактериальная терапия. Тест не заменяет бактериологического исследования крови, ликвора и других стерильных материалов при подозрении на инвазивные формы листериоза — септицемию, менингит, неонатальный листериоз. Результат исследования требует интерпретации врачом — инфекционистом, акушером-гинекологом, неонатологом — с учётом клинической картины, эпидемиологического анамнеза, результатов культуральных и других сопутствующих исследований и общей ситуации.