ПЦР-диагностика грибов рода кандида (Candida albicans) в выпотах

Анализ выявляет ДНК Candida albicans в выпотной жидкости методом ПЦР. Биоматериал — выпот, получаемый при пункции по клиническим показаниям: плевральный, перитонеальный, перикардиальный, синовиальный. Результат выдаётся в формате обнаружено / не обнаружено.

Candida albicans — основной возбудитель кандидозов у человека и наиболее частый вид в составе нормальной микрофлоры слизистых оболочек. У большинства людей возбудитель присутствует на слизистых полости рта, желудочно-кишечного тракта, половых путей в составе факультативной микрофлоры, не вызывая заболевания. Клинически значимые формы развиваются при нарушении баланса микрофлоры, ослаблении местной защиты, на фоне сахарного диабета, иммуносупрессии, антибактериальной терапии, у пациентов с тяжёлыми сопутствующими заболеваниями. 
Обнаружение C. albicans в выпотных жидкостях относится к инвазивному кандидозу, клинически значимой и тяжёлой форме инфекции. Выпотные жидкости в норме стерильны или содержат минимальную микрофлору, и присутствие в них C. albicans обычно указывает на патологический процесс. Источники могут быть разными в зависимости от локализации. При перитоните это перфорация полого органа желудочно-кишечного тракта или несостоятельность анастомоза после абдоминальной операции. При плеврите — распространение из лёгких при тяжёлой пневмонии или из брюшной полости. При перикардите возможно гематогенное распространение или прорастание из соседних структур. При поражении сустава — гематогенное обсеменение или прямое инфицирование при инвазивных вмешательствах. Кандидозный перитонит часто развивается у пациентов на перитонеальном диализе и у пациентов после абдоминальных операций. 
К группам повышенного риска инвазивного кандидоза относятся пациенты после обширных абдоминальных операций, на длительной антибактериальной терапии широкого спектра, с центральными венозными катетерами, на парентеральном питании, с иммуносупрессией (онкологические пациенты на химиотерапии, реципиенты трансплантатов, ВИЧ-инфицированные с выраженным иммунодефицитом), пациенты отделений реанимации с тяжёлыми сопутствующими заболеваниями, новорождённые с очень низкой массой тела.

Базовая лабораторная диагностика инвазивного кандидоза — культуральное исследование крови и других стерильных биоматериалов с выделением возбудителя в культуре, определением вида и оценкой чувствительности к противогрибковым препаратам. Культуральный метод считается золотым стандартом, но его чувствительность при инвазивном кандидозе ограничена, особенно при глубоких формах, и от забора материала до результата проходит несколько дней. ПЦР дополняет культуральный метод за счёт более высокой чувствительности и быстроты получения результата.

Метод ПЦР выявляет специфические участки генома C. albicans в пробе. Метод не зависит от жизнеспособности возбудителя, сохраняет чувствительность при низком его содержании, не требует ожидания роста в культуре. Тест направлен только на C. albicans, наиболее распространённый, но не единственный клинически значимый вид рода Candida. Другие виды (C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis и более редкие) данным исследованием не выявляются, и при необходимости их диагностики выполняются отдельные исследования.

Клиническое значение

Тест применяется при подозрении на кандидозный перитонит, плеврит, перикардит или артрит у пациентов из групп повышенного риска инвазивного кандидоза, особенно когда требуется быстрое подтверждение этиологии для своевременного начала противогрибковой терапии. Молекулярная диагностика выпота служит дополнением к культуральному исследованию, обеспечивая более ранний этиологический ответ, чем посев, и сохраняя чувствительность у пациентов, уже получавших антимикробные препараты.

Положительный результат подтверждает присутствие ДНК C. albicans в выпотной жидкости и поддерживает кандидозную этиологию инфекционного процесса в соответствующей анатомической области. Тактика определяется лечащим врачом, обычно инфекционистом, реаниматологом или хирургом, на основании клинической картины, тяжести состояния пациента, локализации процесса и сопутствующих данных. Параллельно выполняется культуральное исследование выпота и крови для выделения возбудителя и оценки чувствительности к противогрибковым препаратам. При выявлении C. albicans в одной полостной жидкости у пациента с факторами риска инвазивного кандидоза рассматривается оценка распространённости процесса с исключением кандидемии, поражения других стерильных локусов, эндофтальмита.

Отрицательный результат снижает вероятность участия C. albicans в развитии воспалительного процесса в исследованном выпоте, но не исключает другие возможные причины инфекции: другие виды Candida (которые данным тестом не выявляются), бактериальную этиологию, более редкие грибковые возбудители. У пациента с клинической картиной инвазивного грибкового процесса и отрицательным результатом ПЦР на C. albicans диагностический поиск продолжается с учётом возможных не-albicans видов Candida и других возбудителей.

Ограничения

Метод ПЦР выявляет ДНК возбудителя и не говорит о его жизнеспособности. Тест направлен только на C. albicans, тогда как другие виды рода Candida (C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis и более редкие) данным исследованием не выявляются. Часть из них имеет клинически значимые особенности, такие как устойчивость к флуконазолу у C. krusei и сниженная чувствительность у C. glabrata. Качественный формат теста не даёт количественной оценки содержания возбудителя в пробе. Получение выпотной жидкости — инвазивная процедура, выполняемая по строгим клиническим показаниям. На чувствительность метода влияет предшествующая противогрибковая терапия, снижающая количество возбудителя в пробе. Тест не заменяет культурального исследования, остающегося основой для определения вида и оценки чувствительности к противогрибковым препаратам. Результат исследования требует интерпретации врачом, обычно инфекционистом, реаниматологом или хирургом, с учётом клинической картины, локализации процесса, факторов риска инвазивного кандидоза, результатов сопутствующих исследований и общей ситуации.