Определение ДНК гарднереллы вагиналис (Gadnerella vaginalis) в отделяемом урогенитального тракта, методом ПЦР, качественное исследование

Анализ выявляет ДНК Gardnerella vaginalis в отделяемом урогенитального тракта методом ПЦР. Результат выдаётся в формате обнаружено / не обнаружено. Исследование применяется в рамках диагностики нарушений микрофлоры влагалища у женщин, прежде всего при подозрении на бактериальный вагиноз. Отделяемое влагалища — основной биоматериал для оценки состояния урогенитальной микрофлоры; у мужчин G. vaginalis выявляется существенно реже и клинического значения, как правило, не имеет.

Gardnerella vaginalis — факультативно-анаэробная бактерия, относится к роду Gardnerella, семейству Bifidobacteriaceae. Возбудитель представляет собой короткие полиморфные палочки с вариабельным окрашиванием по Граму. Родовая классификация за последние годы пересмотрена: в пределах прежнего единого вида G. vaginalis выделено несколько генетически и клинически неоднородных групп, часть из которых в настоящее время рассматривается как самостоятельные виды рода Gardnerella. Эта неоднородность объясняет широкий разброс клинических данных и существенно ограничивает прежнее представление о G. vaginalis как о «транзиторном» или «однородно патогенном» микроорганизме. Разные геновары различаются по способности формировать биоплёнки на эпителии влагалища, что имеет принципиальное значение для патогенеза бактериального вагиноза и объясняет его склонность к рецидивирующему течению. 
Нормальная микрофлора влагалища у здоровых женщин репродуктивного возраста представлена преимущественно лактобактериями (Lactobacillus spp.), поддерживающими кислую среду и подавляющими рост условно-патогенных микроорганизмов. Бактериальный вагиноз развивается при снижении доли лактобактерий и разрастании анаэробной и факультативно-анаэробной микрофлоры — G. vaginalis, Atopobium vaginae (современное название Fannyhessea vaginae), Prevotella spp., Mobiluncus spp., Megasphaera spp. и других. Клинические проявления включают обильные гомогенные выделения с характерным «рыбным» запахом, умеренный дискомфорт; значительная часть случаев протекает малосимптомно. Диагностика бактериального вагиноза строится на совокупности критериев — клинической картины, pH влагалищного отделяемого, микроскопии мазка с оценкой по критериям Амселя или шкале Ньюджента, молекулярных методов оценки микрофлоры. 
G. vaginalis — ведущий микроорганизм, ассоциированный с бактериальным вагинозом, и ключевой участник формирования биоплёнки на эпителии влагалища. Одновременно возбудитель широко выявляется у здоровых женщин без признаков нарушения микрофлоры: ПЦР обнаруживает G. vaginalis у значительной доли женщин с нормоценозом, что отражает её статус представителя факультативной микрофлоры, а не облигатного патогена. Клиническое значение находки определяется не самим фактом обнаружения возбудителя, а его количеством, соотношением с лактобактериями и общей картиной микрофлоры.

ПЦР выявляет специфические участки генома G. vaginalis и обеспечивает прямое выявление возбудителя в урогенитальном материале. Метод не зависит от жизнеспособности возбудителя и сохраняет работоспособность при субоптимальных условиях транспортировки, характерных для анаэробной и факультативно-анаэробной микрофлоры. Одновременно качественный формат теста имеет существенные ограничения для задачи оценки микрофлоры влагалища: он фиксирует только факт присутствия ДНК возбудителя, без оценки его количества и без сопоставления с состоянием лактофлоры и сопутствующих анаэробных микроорганизмов. Для полноценной характеристики микрофлоры влагалища применяются количественные ПЦР-панели — исследования биоценоза, оценивающие одновременно лактобактерии, гарднереллу, облигатных и факультативных анаэробов, а также дрожжеподобные грибы.

Клиническое значение

Обследование на G. vaginalis рассматривается у женщин с клинической картиной, характерной для бактериального вагиноза — изменением характера выделений, появлением специфического запаха, дискомфортом в области гениталий, — а также при обнаружении лабораторных признаков вагиноза в рамках рутинного обследования. Выявление возбудителя в этих ситуациях согласуется с клиническими и лабораторными данными и подтверждает участие G. vaginalis в картине нарушенной микрофлоры.

У женщин без клинических проявлений обнаружение G. vaginalis само по себе не имеет самостоятельного клинического значения и не требует терапии: возбудитель входит в состав факультативной микрофлоры и выявляется у значительной части здоровых женщин. Изолированное тестирование на G. vaginalis вне контекста оценки микрофлоры в целом имеет ограниченную практическую ценность, и при задаче диагностики бактериального вагиноза предпочтительны количественные ПЦР-панели биоценоза, которые позволяют оценить соотношение ключевых групп микроорганизмов.

Положительный результат подтверждает присутствие G. vaginalis в исследованном материале. Клиническая значимость находки определяется совокупностью данных — клинической картиной, pH влагалищного отделяемого, результатами микроскопии, данными количественной оценки микрофлоры при её выполнении. Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии выявляемого количества G. vaginalis в пробе и снижает вероятность её участия в картине нарушенной микрофлоры, однако при сохраняющейся клинической симптоматике обследование дополняется оценкой других компонентов микрофлоры.

Основу терапии бактериального вагиноза составляют препараты, активные в отношении анаэробной флоры и G. vaginalis, — метронидазол, клиндамицин, — назначаемые лечащим врачом по действующим клиническим рекомендациям. Значимая клиническая проблема — рецидивирующее течение вагиноза, связанное в том числе с формированием биоплёнки с участием G. vaginalis и устойчивостью её геноваров к применяемым препаратам; тактика ведения таких пациенток определяется гинекологом индивидуально.

Ограничения

Метод ПЦР выявляет ДНК возбудителя и не говорит о его жизнеспособности: положительный результат подтверждает присутствие генетического материала G. vaginalis в исследованной пробе, но не разграничивает активное участие возбудителя в картине бактериального вагиноза и его присутствие в составе нормальной факультативной микрофлоры. Качественный формат теста не даёт оценки количества возбудителя в пробе и не позволяет сопоставить его с состоянием лактофлоры и сопутствующих анаэробных микроорганизмов — данными, принципиально важными для диагностики нарушений микрофлоры влагалища. Для этой задачи предпочтительны количественные ПЦР-панели биоценоза влагалища. Тест не различает отдельные геновары рода Gardnerella, часть из которых в настоящее время выделена в самостоятельные виды и различается по клиническому значению. Отрицательный результат снижает вероятность участия G. vaginalis в клинической картине, но не исключает бактериальный вагиноз: при нарушении микрофлоры в клинической картине могут преобладать другие анаэробные возбудители. На чувствительность метода влияет предшествующая системная или местная антибактериальная терапия, а также местное применение антисептиков, снижающих количество возбудителя в пробе. ПЦР не определяет чувствительность G. vaginalis к антибактериальным препаратам. Результат исследования требует интерпретации врачом — гинекологом — с учётом клинической картины, данных микроскопии и pH-метрии влагалищного отделяемого, результатов количественной оценки микрофлоры при её выполнении.