Нарушения сперматогенеза: 6 маркёров (микроделеции локуса AZF)

Исследование предназначено для выявления микроделеций в локусе AZF длинного плеча Y-хромосомы, которые нарушают работу генов, участвующих в образовании и созревании сперматозоидов. В цельной крови с ЭДТА исследуют шесть STS-маркеров: sY84 и sY86 в субрегионе AZFa, sY127 и sY134 в AZFb, sY254 и sY255 в AZFc. Именно этот набор входит в базовую панель, рекомендованную EAA/EMQN для диагностики классических микроделеций AZF; в представленном исследовании дополнительно определяется SRY как контроль присутствия Y-хромосомного материала.
Локус AZF расположен в области Yq11 и включает три основных субрегиона, обозначаемых AZFa, AZFb и AZFc. В них находятся гены и многокопийные семейства генов, необходимые для поддержания мужских половых клеток, прохождения мейоза и последовательных этапов их дифференцировки. К наиболее значимым относятся DDX3Y и USP9Y в AZFa, семейство RBMY в AZFb, а также DAZ и другие гены ампликонической области AZFc. Структура этой части Y-хромосомы содержит крупные повторяющиеся последовательности, между которыми возможна ошибочная рекомбинация с выпадением участка ДНК. Возникающая микроделеция удаляет сразу один или несколько элементов, необходимых для сперматогенеза, поэтому её последствия зависят от протяжённости и конкретного субрегиона. Классические микроделеции AZF являются одной из наиболее значимых молекулярно-генетических причин тяжёлой олигозооспермии и необструктивной азооспермии.

Состав исследования

• sY84, sY86 — маркеры субрегиона AZFa;
• sY127, sY134 — маркеры субрегиона AZFb;
• sY254, sY255 — маркеры субрегиона AZFc; оба расположены в области генов семейства DAZ.

Клиническое значение

Исследование используется для установления генетической причины выраженного нарушения сперматогенеза. Наибольшее клиническое значение микроделеции Y-хромосомы имеют при азооспермии и резко сниженной концентрации сперматозоидов. Согласно рекомендациям EAU, исследование микроделеций Y-хромосомы показано мужчинам с концентрацией сперматозоидов ≤1 млн/мл и рассматривается при концентрации менее 5 млн/мл; частота обнаружения микроделеций максимальна при азооспермии и постепенно снижается по мере увеличения числа сперматозоидов. Обнаружение AZF-делеции в такой ситуации устанавливает конкретную молекулярно-генетическую причину нарушения продукции сперматозоидов и отделяет её от многочисленных приобретённых, эндокринных и других генетических причин мужского бесплодия. 
Клинические последствия существенно различаются между субрегионами. Полная делеция AZFa обычно приводит к наиболее тяжёлому поражению сперматогенеза и ассоциирована с синдромом «только клетки Сертоли», при котором герминативные клетки в семенных канальцах практически отсутствуют. Полная делеция AZFb связана преимущественно с остановкой созревания половых клеток на ранних стадиях сперматогенеза. Поэтому полные делеции, включающие AZFa и AZFb, имеют крайне неблагоприятное прогностическое значение для хирургического получения сперматозоидов; современные рекомендации не предусматривают выполнение тестикулярной экстракции сперматозоидов при подтверждённых полных делециях этих областей. 
Делеция AZFc имеет другой клинический профиль. Это наиболее распространённый вариант классических AZF-микроделеций, а выраженность нарушения сперматогенеза варьирует от тяжёлой олигозооспермии до азооспермии. При сохранении единичных очагов сперматогенеза сперматозоиды могут присутствовать в эякуляте либо обнаруживаться в ткани яичка; по данным EAU, при AZFc-микроделециях тестикулярные сперматозоиды удаётся выявить приблизительно у 50–75% мужчин. Поэтому определение конкретного субрегиона имеет непосредственное значение для оценки вероятности сохранённого сперматогенеза и перспектив получения сперматозоидов для вспомогательных репродуктивных технологий. 
Результат важен и для репродуктивного прогноза семьи. Y-хромосома передаётся от отца сыну, поэтому при наступлении беременности с использованием сперматозоидов мужчины, имеющего AZF-микроделецию, сын наследует соответствующее изменение Y-хромосомы и связанный с ним риск нарушения сперматогенеза. Дочери отцовскую Y-хромосому не наследуют. Выявление микроделеции до применения ВРТ позволяет учитывать этот механизм наследования при генетическом консультировании пары. 
Шестимаркерная панель предназначена прежде всего для выявления классических клинически значимых AZF-делеций. При обнаружении изменений в AZFa или AZFb для точного определения границ делеции и подтверждения её полного характера современные рекомендации EAA/EMQN предусматривают расширенный анализ дополнительных маркеров, поскольку именно протяжённость делеции определяет прогностическое значение для сохранности сперматогенеза. Отрицательный результат по шести исследуемым STS-маркерам означает отсутствие соответствующих классических микроделеций, однако другие генетические причины нарушения сперматогенеза и редкие атипичные изменения за пределами исследуемых участков этим тестом не оцениваются.

Что влияет на результат

Микроделеции AZF являются стабильными изменениями генома и не зависят от времени суток, питания, физической нагрузки, половой активности, уровня половых гормонов или проводимого лечения. Поэтому физиологические колебания, характерные для многих лабораторных показателей, на наличие или отсутствие исследуемых участков Y-хромосомы не влияют.