Молекулярно-генетическое расширенное исследование генов системы гемостаза: F2, F5, MTHFR, MTR, MTRR, F13, FGB, ITGA2, ITGВ3, F7, PAI-1

Исследование определяет наследственные варианты генов, связанных с различными механизмами гемостаза, то есть системы, обеспечивающей остановку кровотечения и поддержание крови в жидком состоянии вне области повреждения сосуда. Панель охватывает образование тромбина и фибрина, стабилизацию сформированного сгустка, взаимодействие тромбоцитов с повреждённой сосудистой стенкой, разрушение фибрина после восстановления целостности сосуда, а также обмен фолатов и гомоцистеина. Такой состав позволяет получить расширенную генетическую характеристику нескольких процессов, способных влиять на индивидуальные особенности свертывания крови, при этом клиническое значение отдельных вариантов существенно различается. В коагуляционном звене F2 кодирует протромбин, из которого образуется тромбин, а F5 кодирует фактор V, необходимый для эффективного превращения протромбина в тромбин. Вариант F5 Лейден нарушает физиологическую инактивацию активированного фактора V протеином C и тем самым поддерживает повышенное образование тромбина; вариант F2 20210G>A связан с повышением уровня протромбина. Эти изменения относятся к установленным наследственным факторам предрасположенности к венозным тромбоэмболическим осложнениям. В этой же системе фактор VII, кодируемый F7 , участвует в запуске коагуляции при повреждении сосудистой стенки, фибриноген с участием β-цепи, кодируемой FGB , служит исходным белком для образования фибрина, а фактор XIII, кодируемый F13A1 , укрепляет сформированную фибриновую сеть. Тромбоцитарное звено представлено генами ITGA2 и ITGB3 . Белок ITGA2 входит в состав рецептора α2β1, через который тромбоциты взаимодействуют с коллагеном повреждённой сосудистой стенки, а ITGB3 является компонентом рецептора αIIbβ3, обеспечивающего связывание активированных тромбоцитов через фибриноген и формирование тромбоцитарного агрегата. Ген SERPINE1 (PAI-1) участвует в регуляции фибринолиза: кодируемый им ингибитор активатора плазминогена ограничивает образование плазмина, расщепляющего фибрин, и тем самым влияет на скорость удаления сформированного сгустка. Гены MTHFR, MTR и MTRR связаны с обменом фолатов и превращением гомоцистеина в метионин. MTHFR обеспечивает образование производного фолата, необходимого для этой реакции, MTR кодирует метионинсинтазу, непосредственно осуществляющую превращение гомоцистеина с участием витамина B12, а MTRR поддерживает метионинсинтазу в функционально активном состоянии. Генетические особенности данного пути могут влиять на концентрацию гомоцистеина, однако выраженность биохимического эффекта зависит также от обеспеченности фолатами и витамином B12.  
Расширенная панель может быть полезна при необходимости получить комплексный наследственный профиль нескольких звеньев гемостаза , например при сочетании тромботического анамнеза с семейной отягощённостью, раннем возникновении сосудистых событий или наличии дополнительных лабораторных изменений гемостаза. Интерпретация такого профиля строится с учётом различного доказательного значения показателей: F2 и F5 определяют установленную наследственную венозную тромбофилию, остальные варианты характеризуют генетические модификаторы коагуляции, тромбоцитарного гемостаза, фибринолиза и обмена гомоцистеина. Такой подход позволяет оценивать каждый выявленный генотип в пределах соответствующего физиологического механизма и клинической задачи, сохраняя информативность расширенного состава исследования.

Состав исследования

• F2 20210G>A : вариант гена протромбина.
• F5 1691G>A : фактор V Лейден.
• F7 10976G>A : вариант гена фактора VII.
• F13A1 103G>T (Val34Leu) : вариант гена A-субъединицы фактора XIII.
• FGB -455G>A : вариант регуляторной области гена β-цепи фибриногена.
• ITGA2 807C>T : вариант гена α2-субъединицы тромбоцитарного рецептора коллагена.
• ITGB3 1565T>C : вариант гена β3-субъединицы тромбоцитарного рецептора фибриногена.
• PAI-1 (SERPINE1) -675 5G/4G : вариант регуляторной области гена ингибитора активатора плазминогена 1.
• MTHFR 677C>T .
• MTHFR 1298A>C .
• MTR 2756A>G .
• MTRR 66A>G .

Клиническое значение

Наиболее установленное клиническое значение в составе панели имеют F5 Лейден и F2 20210G>A , поскольку оба варианта формируют наследственную предрасположенность к венозным тромбоэмболическим осложнениям. Их определение имеет значение при венозном тромбозе или тромбоэмболии лёгочной артерии в молодом возрасте, повторных тромботических эпизодах, выраженной семейной отягощённости, а также при ВТЭО, связанных с беременностью, послеродовым периодом или применением эстрогенсодержащих препаратов. Степень генетической предрасположенности зависит от генотипа: гомозиготное носительство F5 Лейден и сочетание F5 Лейден с F2 20210G>A связано с более высоким риском по сравнению с одиночным гетерозиготным вариантом. Именно F5 Лейден и F2 20210G>A входят наряду с дефицитами антитромбина, протеина C и протеина S в современное понятие лабораторно определяемой наследственной тромбофилии. 
При беременности клиническое значение F2 и F5 определяется физиологическим повышением коагуляционного потенциала и дополнительным влиянием индивидуальных факторов риска ВТЭО. Особенно важен генетический результат у женщин с тромбозом во время предыдущей беременности или после родов, с известной семейной тромбофилией, а также при сочетании нескольких наследственных факторов. Современные рекомендации рассматривают генетическое исследование в отдельных клинических ситуациях, когда установленная тромбофилия может изменить оценку риска во время беременности, послеродового периода или после перенесённого гормонально-ассоциированного ВТЭО. 
Варианты F7 10976G>A, F13A1 103G>T и FGB -455G>A дополняют характеристику коагуляционного звена и структуры фибринового сгустка. F7 10976G>A связан с межиндивидуальными различиями уровня фактора VII, F13A1 Val34Leu изменяет кинетику активации фактора XIII и свойства формирующейся фибриновой сети, а FGB -455G>A связан с вариабельностью содержания фибриногена. Для этих распространённых вариантов характерны значительно меньшие и менее однозначные эффекты по сравнению с F5 Лейден и F2 20210G>A; в крупных исследованиях F13A1 Val34Leu и FGB -455G>A демонстрировали в отдельных популяциях даже умеренную обратную связь с риском ВТЭО. Поэтому их совокупная оценка позволяет характеризовать дополнительные наследственные модификаторы коагуляции без механического отнесения каждого выявленного аллеля к факторам повышенного тромботического риска. 
Определение ITGA2 807C>T и ITGB3 1565T>C характеризует генетическую вариабельность рецепторов, участвующих в адгезии и агрегации тромбоцитов. Для ITGA2 807C>T описана связь с плотностью рецептора α2β1 на поверхности тромбоцитов, однако исследования его ассоциации с ишемическим инсультом и другими артериальными событиями дают неоднородные результаты. Для ITGB3 1565T>C также изучалось влияние на функцию тромбоцитов и риск артериального тромбоза, однако функциональные исследования не подтверждают устойчивого самостоятельного эффекта этого варианта на основные показатели агрегации и секреции тромбоцитов. В расширенной панели оба показателя используются для характеристики тромбоцитарного компонента генетического профиля и интерпретируются совместно с клиническими факторами сердечно-сосудистого риска. 
Вариант PAI-1 (SERPINE1) -675 5G/4G характеризует наследственную вариабельность системы фибринолиза. Аллель 4G ассоциирован с более высокой экспрессией PAI-1, вследствие чего может изменяться интенсивность образования плазмина и расщепления фибрина. В исследованиях этот вариант демонстрировал умеренные ассоциации с венозными и артериальными тромботическими событиями, однако размер эффекта значительно меньше, чем у F5 Лейден и F2 20210G>A, и недостаточен для самостоятельной диагностики наследственной тромбофилии. В составе расширенной панели результат PAI-1 используется как дополнительная характеристика наследственных особенностей фибринолитического звена. 
Исследование MTHFR, MTR и MTRR позволяет оценить наследственную составляющую фолат-зависимого метаболизма гомоцистеина, особенно при установленной или повторно выявляемой гипергомоцистеинемии. Наиболее изучен MTHFR 677C>T: генотип TT связан со снижением активности фермента, а выраженность его влияния на гомоцистеин зависит от обеспеченности фолатами. Варианты MTHFR 1298A>C, MTR 2756A>G и MTRR 66A>G характеризуют дополнительные особенности этого метаболического пути, которые наиболее информативно оцениваются совместно с концентрацией гомоцистеина, фолатов и витамина B12. Эти варианты относятся к генам фолатного обмена и имеют иной диагностический вес, чем F5 Лейден и F2 20210G>A; профессиональные рекомендации не относят распространённые варианты MTHFR к установленным маркерам наследственной тромбофилии.

Что влияет на результат

После аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток ДНК лейкоцитов периферической крови может соответствовать генотипу донора вследствие формирования донорского кроветворения. Для определения наследственных вариантов самого пациента в такой ситуации требуется исследование биологического материала, содержащего собственную ДНК реципиента.