Молекулярно-генетическое исследование опухолевой ткани при колоректальном раке: MSI, мутации BRAF V600E, KRAS и NRAS

Комплекс позволяет определить молекулярные характеристики колоректальной опухоли, связанные с чувствительностью к иммунотерапии и таргетным препаратам. Определение микросателлитной нестабильности, мутаций KRAS и NRAS и мутации BRAF V600E помогает выбрать направление системного противоопухолевого лечения, выявить устойчивость к анти-EGFR-терапии и установить показания к дальнейшему обследованию на синдром Линча. Молекулярное профилирование имеет наибольшее значение при нерезектабельном, рецидивирующем или метастатическом колоректальном раке.
Для анализа используют фиксированную формалином и залитую парафином ткань первичной колоректальной опухоли или её метастаза. В лабораторию предоставляют парафиновый блок и соответствующие ему гистологические стекла. Микросателлитную нестабильность определяют методом фрагментного анализа, мутации BRAF, KRAS и NRAS - методом ПЦР.
Исследование характеризует соматические изменения клеток опухоли. Выявление микросателлитной нестабильности может указывать на наследственное нарушение системы репарации ДНК, однако подтверждение синдрома Линча требует отдельного исследования генов репарации в неопухолевом материале.

Состав исследования

• Определение микросателлитной нестабильности (MSI).
• Определение мутации BRAF V600E в 15-м экзоне.
• Определение мутаций во 2-м, 3-м и 4-м экзонах гена KRAS.
• Определение мутаций во 2-м, 3-м и 4-м экзонах гена NRAS.

Каждый компонент комплекса выдаётся отдельным результатом. 

Клиническое значение

Статус генов KRAS и NRAS определяет возможность применения препаратов, направленных на рецептор эпидермального фактора роста EGFR. Активирующие мутации RAS поддерживают рост опухолевых клеток независимо от активности этого рецептора, поэтому при их выявлении стандартная анти-EGFR-терапия цетуксимабом или панитумумабом не обеспечивает ожидаемого эффекта. Отсутствие мутаций в исследуемых участках KRAS и NRAS позволяет рассматривать анти-EGFR-препараты с учётом локализации первичной опухоли, BRAF-статуса и других характеристик заболевания. Выявление определённого варианта KRAS также может устанавливать самостоятельную лекарственную мишень. Мутация KRAS G12C при ранее леченном распространённом колоректальном раке используется для выбора терапии, сочетающей ингибитор KRAS G12C и препарат, блокирующий EGFR. Остальные выявленные мутации KRAS и NRAS сохраняют значение прежде всего как маркеры устойчивости к стандартной анти-EGFR-терапии.
Мутация BRAF V600E выделяет колоректальный рак в отдельную молекулярную группу, связанную с особенностями клинического течения и собственным направлением таргетного лечения. При метастатическом заболевании результат служит основанием для одновременного воздействия на BRAF и EGFR. Такое сочетание ограничивает восстановление сигнала опухолевого роста через рецептор EGFR, которое возникает при изолированном подавлении BRAF.
Микросателлитная нестабильность возникает при нарушении системы исправления ошибок, образующихся во время копирования ДНК. Опухоли с высокой микросателлитной нестабильностью накапливают многочисленные генетические изменения и становятся более заметными для иммунной системы. При нерезектабельном или метастатическом колоректальном раке выявление MSI-H определяет возможность применения ингибиторов контрольных точек иммунного ответа. MSI также используется для выявления колоректальных опухолей, связанных с синдромом Линча. При обнаружении микросателлитной нестабильности дальнейшее обследование включает оценку белков системы репарации ДНК, метилирования промотора MLH1 и наследственных вариантов соответствующих генов. В опухолях с утратой MLH1 и PMS2 наличие BRAF V600E поддерживает спорадическое происхождение нарушения, связанное с метилированием MLH1, и снижает вероятность синдрома Линча.

Результат «мутация не обнаружена» относится только к участкам генов, входящим в состав комплекса. Он не исключает изменений за пределами исследуемых экзонов и других молекулярных нарушений, имеющих значение при колоректальном раке.

Что влияет на результат

Выявление мутаций и микросателлитной нестабильности зависит от содержания опухолевых клеток в выбранном участке ткани. Большое количество нормальных клеток, слизи, воспалительных элементов, фиброза или некротических масс уменьшает долю опухолевой ДНК. При снижении содержания изменённого варианта ниже аналитической чувствительности метода мутация или микросателлитная нестабильность может остаться невыявленной. Продолжительная или неравномерная фиксация ткани формалином повреждает ДНК и снижает количество материала, пригодного для ПЦР и фрагментного анализа. Для исследования выбирают парафиновый блок с сохранной опухолевой тканью и достаточным содержанием жизнеспособных опухолевых клеток.