Молекулярно-генетическое исследование мутаций BRAF V600E, KRAS, NRAS, HRAS и промотора TERT в опухолевой ткани щитовидной железы

Опухоли щитовидной железы, происходящие из фолликулярных клеток, включают папиллярные и фолликулярные карциномы, а также высокозлокачественные формы, возникающие при дальнейшем изменении и утрате дифференцировки опухолевых клеток. Их свойства определяются гистологическим строением, характером инвазии и набором приобретённых генетических изменений. Молекулярный профиль позволяет установить путь развития опухоли и выявить дополнительные изменения, связанные с её прогрессированием. В основе большинства опухолей этой группы лежит одно из двух молекулярных направлений. Для папиллярных карцином характерен BRAF-подобный профиль, чаще всего связанный с мутацией BRAF V600E. Опухоли с фолликулярным строением преимущественно относятся к RAS-подобной группе и могут содержать мутации KRAS, NRAS или HRAS. Присоединение мутаций промотора TERT отражает дальнейшее изменение опухолевого клона и связано с приобретением более агрессивных биологических свойств.
Комплексное определение BRAF V600E, мутаций генов семейства RAS и промотора TERT дополняет гистологическое заключение молекулярной характеристикой опухоли. Исследование помогает уточнить её происхождение, оценить сочетание ранних драйверных и последующих прогрессирующих изменений, дополнить послеоперационную оценку риска рецидива и выявить BRAF V600E как лекарственную мишень при распространённом заболевании.
Анализ выполняют методом ПЦР на опухолевой ткани, фиксированной формалином и залитой парафином. В лабораторию предоставляют парафиновый блок и соответствующие ему гистологические стекла. Исследование характеризует соматические изменения клеток выбранного опухолевого очага.

Состав исследования

• Мутация BRAF V600E.
• Патогенные варианты в кодонах 12 и 13 гена KRAS.
• Патогенные варианты в кодоне 61 гена NRAS.
• Патогенные варианты в кодонах 12, 13 и 61 гена HRAS.
• Мутации C228T и C250T в промоторной области гена TERT.

Результаты по BRAF, генам семейства RAS и промотору TERT выдаются отдельно. 

Клиническое значение

Исследование дополняет гистологическое заключение молекулярной характеристикой опухоли щитовидной железы. Совместное определение BRAF V600E, мутаций KRAS, NRAS и HRAS, а также изменений C228T и C250T промотора TERT позволяет установить направление развития опухоли, уточнить биологические свойства новообразования, дополнить послеоперационную оценку риска прогрессирования и выявить терапевтически значимую мишень. Клиническая роль панели определяется сочетанием найденных изменений, поскольку BRAF и RAS характеризуют основной молекулярный тип опухоли, а TERT отражает приобретение признаков дальнейшего прогрессирования. Обнаружение BRAF V600E указывает на BRAF-подобный молекулярный профиль, наиболее характерный для папиллярного рака щитовидной железы. Результат подтверждает папиллярное направление развития опухоли и дополняет морфологическую классификацию при неоднородном строении, сочетании дифференцированного и низкодифференцированного компонентов или признаках анапластической трансформации. Прогностическое значение BRAF V600E усиливается при одновременном выявлении мутации промотора TERT: такое сочетание связано с повышенной вероятностью рецидива, прогрессирования и метастазирования. При местно-распространённом или метастатическом анапластическом раке BRAF V600E также служит мишенью для терапии, направленной на BRAF и MEK.
Мутации KRAS, NRAS и HRAS определяют RAS-подобный молекулярный профиль, характерный преимущественно для новообразований с фолликулярным строением. Их обнаружение подтверждает наличие драйверного изменения, сформировавшего опухолевый клон, и помогает отнести новообразование к фолликулярному направлению развития. В операционном материале RAS-статус дополняет классификацию опухолей со смешанной архитектурой, помогает интерпретировать сочетание дифференцированного и низкодифференцированного компонентов и раскрывает молекулярную основу фолликулярной карциномы. Гистологическое исследование устанавливает наличие капсулярной и сосудистой инвазии, а мутации RAS характеризуют происхождение и биологический тип опухоли.
Особая роль KRAS, NRAS и HRAS в составе панели связана с совместной оценкой промотора TERT. Изолированная мутация RAS характеризует исходный драйвер фолликулярной опухоли. Одновременное обнаружение RAS и TERT указывает на накопление дополнительного изменения, сопровождающего усиление опухолевой активности, снижение дифференцировки и повышение способности к инвазивному росту и метастазированию. Поэтому RAS-статус выполняет одновременно классификационную и прогностическую функции.
Мутации C228T и C250T промотора TERT имеют наибольшее значение для послеоперационной оценки биологического поведения опухоли. Их выявление связано с повышенной вероятностью сохранения опухолевого процесса, рецидива, отдалённого метастазирования и неблагоприятного течения. Особенно значимы сочетания TERT с BRAF V600E или одной из мутаций RAS, поскольку они отражают присутствие основного драйвера и дополнительного изменения, связанного с прогрессированием. Результат дополняет оценку риска, основанную на гистологическом типе, размере опухоли, сосудистой и экстратиреоидной инвазии, состоянии краёв резекции, поражении лимфатических узлов и наличии отдалённых метастазов.

Отсутствие исследуемых мутаций означает, что в опухоли не выявлены варианты, входящие в данную ПЦР-панель. Результат не охватывает остальные участки BRAF, KRAS, NRAS, HRAS и TERT, генные перестройки и другие молекулярные изменения опухолей щитовидной железы.

Что влияет на результат

Выявление мутаций зависит от содержания опухолевых клеток в выбранном участке парафинового блока. Примесь неизменённой ткани щитовидной железы, воспалительных клеток, крови, фиброза и некротических масс уменьшает долю опухолевой ДНК. При снижении количества мутантного варианта ниже аналитической чувствительности ПЦР изменение может остаться невыявленным. Продолжительная или неравномерная фиксация ткани формалином повреждает ДНК и уменьшает количество материала, пригодного для анализа. Для выделения ДНК выбирают сохранный участок с достаточным содержанием опухолевых клеток. Соответствие исследуемой зоны гистологической картине оценивают по стеклу, относящемуся к предоставленному парафиновому блоку. При многофокусной опухоли отдельные очаги могут иметь различное происхождение и отличаться по мутационному профилю. Для анализа используют блок из очага, молекулярные свойства которого требуется определить.