Анализ на мутацию V617F в 14-м экзоне гена JAK2

Ген JAK2 кодирует янус-киназу 2-го типа, которая передаёт внутрь кроветворных клеток сигналы от рецепторов эритропоэтина, тромбопоэтина и других факторов роста. Эти сигналы регулируют выживание, размножение и созревание эритроцитов, тромбоцитов и других клеток миелоидного ряда. После завершения внешнего сигнала активность янус-киназы снижается, что ограничивает образование клеток крови в соответствии с потребностями организма. Мутация JAK2 V617F представляет собой замену гуанина на тимин в позиции 1849 кодирующей последовательности гена JAK2, c.1849G>T. В результате в положении 617 белка валин заменяется фенилаланином, p.Val617Phe. Изменение расположено в 14-м экзоне и нарушает работу регуляторного участка, сдерживающего активность янус-киназы. Мутантный белок постоянно передаёт сигналы по пути JAK-STAT, поддерживая выживание и размножение кроветворных клеток без обычной зависимости от факторов роста. JAK2 V617F возникает в течение жизни в одной из гемопоэтических стволовых клеток и передаётся образующимся из неё клеткам крови. Мутация является соматической и обычно отсутствует в половых клетках, поэтому связанное с ней миелоидное новообразование не передаётся детям. Расширение мутантного клона может приводить к избыточному образованию эритроцитов, тромбоцитов или клеток других миелоидных линий.
Исследование используют при стойком повышении гемоглобина, гематокрита, количества эритроцитов или тромбоцитов, при подозрении на миелофиброз, необъяснимом увеличении селезёнки и тромбозах вен брюшной полости. Анализ помогает выявить JAK2-мутантный клон и подтвердить клональный характер нарушенного кроветворения при подозрении на истинную полицитемию, эссенциальную тромбоцитемию или первичный миелофиброз.
Исследование выполняет качественное выявление мутации JAK2 V617F в крови. Результат выдаётся в формате «обнаружено» или «не обнаружено». Метод выявляет мутацию при доле мутантного аллеля более 1% в исследуемом образце. Качественный анализ определяет факт наличия генетического варианта. Для измерения аллельной нагрузки применяют отдельное количественное исследование.

Клиническое значение

JAK2 V617F относится к основным драйверным мутациям классических BCR::ABL1-негативных миелопролиферативных новообразований, она выявляется более чем у 95% пациентов с истинной полицитемией и у 50–60% пациентов с эссенциальной тромбоцитемией или первичным миелофиброзом. Одинаковое молекулярное изменение встречается при нескольких заболеваниях, поэтому их разграничение основано на показателях периферической крови, морфологии костного мозга и клинических проявлениях. При стойком повышении гемоглобина, гематокрита или количества эритроцитов обнаружение JAK2 V617F является важным молекулярным критерием истинной полицитемии. Заболевание характеризуется клональным усилением образования эритроцитов и может сопровождаться лейкоцитозом, тромбоцитозом, увеличением селезёнки, повышенной вязкостью крови и тромбозами. Результат анализа сопоставляют с концентрацией эритропоэтина, показателями общего анализа крови и строением костного мозга. При отрицательном результате и сохраняющихся признаках истинной полицитемии исследуют другие активирующие изменения JAK2, прежде всего мутации 12-го экзона.
При стойком тромбоцитозе JAK2 V617F входит в число основных драйверных изменений, учитываемых при диагностике эссенциальной тромбоцитемии. Заболевание сопровождается клональным увеличением количества мегакариоцитов в костном мозге и тромбоцитов в крови, что повышает вероятность тромбозов и нарушений микроциркуляции. Для установления диагноза оценивают морфологию мегакариоцитов и исключают реактивные причины тромбоцитоза и другие миелоидные новообразования. При отсутствии JAK2 V617F исследуют драйверные мутации CALR и MPL.
При первичном миелофиброзе JAK2 V617F является одним из основных драйверных вариантов наряду с мутациями CALR и MPL. Заболевание связано с патологическим размножением клеток миелоидного ряда и постепенным изменением структуры костного мозга, оно может сопровождаться фиброзом костного мозга, анемией, увеличением селезёнки, общей слабостью, снижением массы тела и появлением незрелых клеток в периферической крови. Исследование имеет особое значение при тромбозах вен брюшной полости, включая тромбоз воротной, селезёночной и брыжеечных вен, а также нарушение оттока по печёночным венам, в том числе синдром Бадда–Киари. JAK2 V617F может выявляться при скрытом миелопролиферативном новообразовании до появления выраженного эритроцитоза или тромбоцитоза. Обнаружение мутации в такой ситуации служит основанием для целенаправленного обследования системы кроветворения.

Положительный результат означает присутствие в крови клеточного клона с мутацией JAK2 V617F. При характерных изменениях крови и костного мозга результат поддерживает диагноз миелопролиферативного новообразования. У части людей небольшой JAK2-мутантный клон выявляется при отсутствии достаточных критериев конкретного заболевания и может соответствовать клональному кроветворению. В такой ситуации учитывают показатели крови, размер клона по данным количественного исследования и изменения в динамике. Отрицательный результат означает, что JAK2 V617F не выявлена выше аналитического порога метода. Дальнейшее обследование определяют по характеру нарушений, при подозрении на истинную полицитемию исследуют другие мутации JAK2. При подозрении на эссенциальную тромбоцитемию или первичный миелофиброз определяют изменения CALR и MPL. Для разграничения классических BCR::ABL1-негативных миелопролиферативных новообразований и хронического миелоидного лейкоза исследуют BCR::ABL1.

Что влияет на результат

Низкая доля мутантных клеток может привести к результату «не обнаружено», если содержание аллеля JAK2 V617F составляет менее 1%. Это возможно при небольшом размере клеточного клона или низком содержании мутантных клеток в периферической крови. Терапия, уменьшающая размер патологического клона, может снижать долю JAK2 V617F в крови. Результат исследования на фоне лечения отражает состав кроветворения на момент взятия материала. Для оценки изменения аллельной нагрузки применяют количественное исследование. После аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток выявление мутации зависит от соотношения клеток донора и реципиента: уменьшение или исчезновение JAK2 V617F в крови связано с замещением собственного мутантного кроветворения донорскими клетками.