Маркер развития Ph’-негативных хронических миелопролиферативных заболеваний (ХМПЗ): количественное определение соотношения нормального и мутантного аллелей 617V/617F гена JAK2 (Marker of Ph-negative Chronic Myeloproliferative Disorders (cMPD): quantification of wild-type and mutant allelic ratio of gene JAK2 617V/617F)

JAK2 (янус-киназа 2) представляет собой внутриклеточный фермент, передающий сигнал от рецепторов эритропоэтина, тромбопоэтина и других ростовых факторов к ядру кроветворной клетки. В норме киназа активируется только после связывания рецептора с соответствующим гормоном, что удерживает продукцию клеток крови под контролем потребностей организма. Мутация V617F возникает в стволовой кроветворной клетке как соматическое (приобретённое) событие: замена валина на фенилаланин в 617-м положении белка нарушает работу собственного тормозного домена киназы, и фермент переходит в постоянно активное состояние. Клетка начинает делиться независимо от ростовых сигналов, её потомки формируют опухолевый клон, который постепенно вытесняет нормальное кроветворение. Тест количественно определяет соотношение мутантного и нормального аллелей гена JAK2, то есть аллельную нагрузку: долю копий гена, несущих мутацию, среди всех проанализированных копий.

Мутация JAK2 V617F выявляется примерно у 95% пациентов с истинной полицитемией и у 50–60% пациентов с эссенциальной тромбоцитемией и первичным миелофиброзом. Эти три заболевания объединяют в группу Ph-негативных хронических миелопролиферативных новообразований, поскольку при них отсутствует филадельфийская хромосома и химерный ген BCR-ABL, характерные для хронического миелолейкоза. Обнаружение мутации входит в большие диагностические критерии ВОЗ для всех трёх заболеваний. Практический смысл исследования состоит в разграничении клональной и реактивной природы изменений крови: стойкое повышение гемоглобина, эритроцитов или тромбоцитов встречается и при обезвоживании, курении, хронической гипоксии, воспалении, дефиците железа, однако мутация JAK2 V617F при реактивных состояниях отсутствует. Положительный результат подтверждает опухолевую природу миелопролиферации и в сочетании с картиной крови, уровнем эритропоэтина и данными исследования костного мозга позволяет установить конкретный диагноз. Отрицательный результат при сохраняющемся подозрении на эссенциальную тромбоцитемию или миелофиброз направляет обследование на поиск других характерных мутаций (в генах CALR и MPL), поскольку часть случаев этих заболеваний протекает без изменений в гене JAK2.

Количественный формат результата даёт дополнительную информацию по сравнению с простым обнаружением мутации. Аллельная нагрузка отражает долю опухолевого клона в кроветворении: при эссенциальной тромбоцитемии она обычно невысока и соответствует гетерозиготному состоянию, тогда как при истинной полицитемии и миелофиброзе нередко превышает 50%, что указывает на утрату нормального аллеля в клетках клона. Высокая аллельная нагрузка ассоциирована с более выраженной пролиферацией и, по данным ряда исследований, с повышенным риском тромботических осложнений и трансформации в миелофиброз, поэтому исходное значение учитывается при оценке течения болезни. Повторное количественное определение применяется для отслеживания молекулярного ответа: снижение аллельной нагрузки на фоне терапии препаратами интерферона-альфа и после трансплантации кроветворных стволовых клеток свидетельствует об уменьшении опухолевого клона, а её повторный рост после трансплантации служит ранним признаком возврата заболевания.