Комплексное определение концентрации на аминокислоты и ацилкарнитины в крови методом тандемной масс-спектрометрии («ПЯТОЧКА» неонатальный скрининг)

Анализ спектра аминокислот и ацилкарнитинов сдают для диагностики и мониторинга различных метаболических заболеваний, включая наследственные нарушения обмена веществ, такие как органические ацидурии, аминокислотопатии и расстройства β-окисления жирных кислот. В этом тесте измеряют концентрации различных аминокислот и ацилкарнитинов в крови, что позволяет выявить накопление или дефицит этих веществ, указывающих на определенные метаболические сбои. Например, повышенные уровни специфических аминокислот могут свидетельствовать о нарушениях в их метаболизме, таких как фенилкетонурия или гомоцистинурия, в то время как изменения в уровнях ацилкарнитинов могут быть индикаторами нарушений окисления жирных кислот, таких как дефицит карнитин-пальмитоилтрансферазы. Этот анализ особенно важен для раннего выявления и лечения метаболических расстройств у новорожденных и детей.

Перечень выявляемых наследственных болезней обмена веществ

Болезнь с запахом кленового сиропа мочи (лейциноз)
Цитрулинемия тип 1, неонатальная цитрулинемия
Аргининосукциновая ацидурия (АСА)/ недостаточность аргининосукцинат лиазы лиазы
Недостаточность орнитин транскарбамилазы
Недостаточность карбамилфосфат синтазы
Недостаточность N-ацетилглютамат синтазы
Некетотическая гиперглицинемия
Тирозинемия тип 1
Тирозинемия тип 2
Гомоцистинурия/недостаточность цистатионин бета-синтетазы
Фенилкетонурия
Аргининемия/недостаточность аргиназы
Пропионовая ацидемия (недостаточность пропионил КоА карбоксилазы)
Метилмалоновая ацидемия
Изовалериановая ацидемия (недостаточность изовалерил КоА дегидрогеназы)
Недостаточность 2-метилбутирил КоА дегидрогеназы
Недостаточность изобутирил КоА дегидрогеназы
Глутаровая ацидемия тип 1 (недостаточность глутарил КоА дегидрогеназы тип 1)
Недостаточность 3-метилкротонил КоА карбоксилазы
Множественная карбоксилазная недостаточность
Недостаточность биотинидазы
Малоновая ацидемия (недостаточность малонил КоА декарбоксилазы)
Недостаточность митохондриальной ацетоацетил КоА тиолазы
Недостаточность 2-метил-3-гидроксибутирил КоА дегидрогеназы
Недостаточность 3-гидрокси-3-метилглутарил КоА лиазы
Недостаточность 3-метилглутаконил КоА гидратазы
Недостаточность среднецепочечной ацил-КоА дегидрогеназы
Недостаточность очень длинноцепочечной ацил-КоА дегидрогеназы
Недостаточность короткоцепочечной ацил-КоА дегидрогеназы
Недостаточность длинноцепочечной 3-гидроксиацил-КоА дегидрогеназы (дефект трифункционального белка)
Глутаровая ацидемия тип II (недостаточность глутарил КоА дегидрогеназы тип II), множественная недостаточность ацил-КоА дегидрогеназ
Нарушение транспорта карнитина
Недостаточность карнитин палмитоил трансферазы тип I
Недостаточность карнитин палмитоил трансферазы тип II
Недостаточность карнитин/ацилкарнитин транслоказы
Недостаточность 2,4-диеноил КоА редуктазы
Недостаточность среднецепочечной 3-кетоацил-КоА тиолазы
Недостаточность средне-/короткоцепочечной ацил-КоА дегидрогеназы

Тест проводят в целях диагностики наследственных болезней обмена веществ.

Технология метода и правила взятия крови

Технология взятия крови методом сухой капли строго стандартизирована, поскольку качество преаналитического этапа напрямую влияет на достоверность результатов. Забор крови у новорождённых осуществляется из латеральной поверхности пятки, у детей старшего возраста и взрослых - из пальца. Перед проколом кожу согревают для улучшения капиллярного кровотока, обрабатывают антисептиком и дают ему полностью высохнуть. Прокол выполняют одноразовым стерильным ланцетом на достаточную глубину, избегая чрезмерного сдавления тканей, так как это может привести к гемолизу и примеси тканевой жидкости.

Алгоритм корректного нанесения крови:

• Первая капля: Первую вышедшую каплю крови необходимо аккуратно стереть сухим стерильным тампоном, так как она содержит тканевую жидкость.
• Формирование капли: Следует дождаться образования крупной, «висячей» капли крови. Нельзя сильно сдавливать ткани (выжимать кровь), это приводит к разбавлению образца лимфой.
• Контакт с фильтром: Нужно поднести карточку к капле так, чтобы кровь коснулась центра обозначенного круга. Бумага должна впитать кровь самостоятельно за счет капиллярных сил.
• Однократность нанесения: Каждое кольцо на бланке должно быть заполнено одной каплей за один прием. Категорически запрещено наносить кровь слоями (капля на каплю) или касаться карточкой кожи.
• Контроль заполнения: Кровь должна полностью пропитать фильтровальную бумагу так, чтобы пятно было одинаковым по диаметру и интенсивности цвета с обеих сторон бланка.

Признаки некачественного образца:

• «Слоеное» нанесение: Неравномерная концентрация метаболитов из-за наслоения крови.
• Недостаточный объем: Круг не заполнен полностью или бумага не пропитана насквозь.
• Загрязнение: Наличие следов спирта, влаги, кремов или прикосновение пальцами к зоне фильтра.
• Гемолиз или сгустки: Возникают при избыточном сдавливании пятки или слишком медленном заборе.

Для точной тандемной масс-спектрометрии критически важно, чтобы пятно крови было симметричным и равномерно окрашенным с обеих сторон бланка. Недопустимо наличие неокрашенных участков внутри круга или выход крови за его границы. Высушенные карты упаковываются в воздухопроницаемый конверт, часто с влагопоглотителем, и направляется в лабораторию, конверт не запечатывается. Важным является соблюдение сроков транспортировки и условий хранения, так как некоторые ацилкарнитины и аминокислоты чувствительны к влаге и температуре.