Кариотип онкогематологический

Онкогематологический кариотип представляет собой цитогенетическое исследование числа и структуры хромосом в делящихся клетках периферической крови, предназначенное для выявления приобретённых хромосомных нарушений опухолевого клеточного клона. Клетки крови культивируют с митогенной стимуляцией и исследуют на стадии метафазы, когда отдельные хромосомы можно различить и оценить их строение. Метод позволяет обнаруживать изменения числа хромосом, крупные делеции и дупликации, транслокации, инверсии, маркерные хромосомы и сочетания нескольких нарушений. Одновременная оценка всего хромосомного набора особенно важна при лимфопролиферативных заболеваниях, поскольку позволяет увидеть общую цитогенетическую структуру опухолевого клона, включая изменения, которые заранее не были выбраны для прицельного поиска. 
Исследование проводится по цельной периферической крови и применяется главным образом при хроническом лимфоцитарном лейкозе и неходжкинских лимфомах с циркуляцией опухолевых клеток в крови. Для анализа используют митоген-стимулированные B- или T-лимфоциты в зависимости от предполагаемого заболевания; лаборатория оценивает несколько десятков метафаз и определяет, присутствует ли повторяющееся хромосомное нарушение в группе клеток, соответствующей патологическому клону.
Результат оформляется в виде заключения врача с записью кариотипа по номенклатуре ISCN. Например, запись 46,XY[20] соответствует мужскому кариотипу без обнаруженных хромосомных нарушений в двадцати исследованных метафазах, а 46,XX,t(11;14)(q13;q32)[20] указывает на присутствие транслокации t(11;14) во всех двадцати проанализированных метафазах. Нормальный результат означает отсутствие цитогенетически выявляемых нарушений в исследованных клетках и оценивается вместе с иммунофенотипированием, FISH и другими исследованиями, предусмотренными для конкретного лимфопролиферативного заболевания.

Клиническое значение

При хроническом лимфоцитарном лейкозе (ХЛЛ) кариотипирование позволяет определить хромосомную структуру опухолевого клона и выявить как отдельные цитогенетические нарушения, так и их сочетания. При ХЛЛ встречаются трисомия 12, изменения участков хромосом 13q, 11q, 17p, 6q и другие приобретённые аномалии, однако часть небольших делеций более чувствительно определяется методом FISH. Особое значение стандартного кариотипирования связано с выявлением сложного кариотипа , который показывает наличие нескольких независимых хромосомных нарушений в одном опухолевом клоне. Наиболее устойчивое неблагоприятное прогностическое значение имеет высокосложный кариотип с пятью и более аберрациями, тогда как клиническое значение меньшего числа изменений зависит от их состава и других молекулярных особенностей заболевания. Поэтому кариотип оценивают вместе с FISH, статусом TP53, мутационным статусом IGHV, иммунофенотипированием и клиническими данными, формируя более полную характеристику ХЛЛ и его прогноза. 
При неходжкинских лимфомах и других зрелых лимфоидных неоплазиях , если опухолевые клетки присутствуют в периферической крови, определённые хромосомные перестройки помогают уточнить тип заболевания и разграничить процессы со сходной морфологической или иммунологической картиной. Например, транслокация t(11;14)(q13;q32) характерна для лимфомы из клеток мантийной зоны и связана с перестройкой, затрагивающей CCND1 и локус иммуноглобулиновых тяжёлых цепей. Обнаружение такой или другой характерной аномалии позволяет сопоставить цитогенетический результат с иммунофенотипом и при необходимости продолжить исследование прицельным FISH или молекулярно-генетическим методом. При этом кариотип одновременно показывает дополнительные хромосомные изменения, благодаря чему можно определить цитогенетическую сложность опухолевого клона и выявить аномалии, которые не входили в первоначальный диагностический поиск. 
При прогрессировании или рецидиве лимфопролиферативного заболевания возможно появление новых хромосомных нарушений , формирующих изменённый цитогенетический профиль опухолевого клона. Сравнение с ранее полученным кариотипом позволяет обнаружить такую клональную эволюцию и дополнить сведения об изменении биологии заболевания. Для высокочувствительного определения небольшого остаточного опухолевого клона используются более чувствительные методы, поэтому повторное стандартное кариотипирование наиболее полезно именно для оценки крупных хромосомных изменений и появления новых цитогенетических клонов.

Что влияет на результат

Для полноценного кариотипирования необходимо получить достаточное количество жизнеспособных клеток, способных делиться и формировать метафазные пластинки. Отсутствие или недостаточное количество пригодных метафаз может быть связано с низким митотическим индексом клеточной культуры, малым объёмом периферической крови, низкой клеточностью образца или небольшим количеством циркулирующих патологических клеток. Предшествующая химиотерапия также способна уменьшать количество опухолевых клеток и подавлять их пролиферативную активность, что снижает вероятность получения достаточного числа метафаз для анализа. Жизнеспособность клеток зависит от соблюдения условий транспортировки биоматериала. Периферическая кровь должна быть доставлена не позднее 48 часов после взятия при температуре +4…+8 °C. Нарушение времени или температурного режима может привести к снижению жизнеспособности клеток и невозможности получить достаточное количество метафазных пластинок для цитогенетического анализа.