ПЦР-диагностика РНК вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1 (HIV-1) в плазме крови, качественно

ПЦР-диагностика РНК ВИЧ-1 — молекулярно-биологическое исследование, выявляющее генетический материал вируса иммунодефицита человека 1-го типа (ВИЧ-1) в плазме крови. Тест-система анализирует субтипы групп M, O, N и P вируса ВИЧ-1. Исследование не определяет ВИЧ-2 — для его выявления предназначены отдельные тесты. ВИЧ-1 — РНК-содержащий вирус семейства Retroviridae, поражающий клетки иммунной системы (преимущественно CD4+ Т-лимфоциты, а также макрофаги и другие клетки) и при отсутствии лечения приводящий к прогрессирующему иммунодефициту и развитию синдрома приобретённого иммунодефицита (СПИД). ВИЧ передаётся через кровь (инъекционное употребление наркотиков, инвазивные медицинские манипуляции, переливание непроверенных компонентов крови, ранение инфицированными инструментами), половым путём и вертикально (от матери ребёнку во время беременности, родов и грудного вскармливания).

Проникнув в CD4+ лимфоциты и другие клетки-мишени, вирус синтезирует ДНК-копию своего РНК-генома (обратная транскрипция) и встраивает её в геном клетки-хозяина в виде провирусной ДНК. В таком состоянии провирус может существовать неопределённо долго, не проявляя активности. Когда начинается экспрессия вирусных белков и активное размножение вируса, заражённые клетки разрушаются, что ведёт к прогрессирующему снижению числа CD4+ лимфоцитов и нарастающему иммунодефициту. Именно наличие стабильного провирусного резервуара объясняет, почему ВИЧ-инфекция на сегодняшний день не может быть полностью излечена и антиретровирусная терапия (АРТ) является пожизненной.

ВИЧ-инфекция остаётся одной из наиболее значимых проблем мирового здравоохранения. При этом современная АРТ кардинально изменила прогноз заболевания: при своевременном начале лечения и подавлении вирусной нагрузки до неопределяемого уровня продолжительность и качество жизни пациентов приближаются к таковым у неинфицированных лиц. Более того, пациент с неопределяемой вирусной нагрузкой практически не передаёт вирус половому партнёру — принцип «Н=Н» (неопределяемый = непередающий). Это делает лабораторную диагностику и мониторинг вирусной нагрузки центральными инструментами как индивидуального ведения пациента, так и эпидемического контроля.

В период 3–6 недель после инфицирования обычно развивается острый ретровирусный синдром, для которого характерны гриппоподобные симптомы (лихорадка, лимфаденопатия, фарингит, сыпь, миалгии) и высокий уровень виремии. После формирования иммунного ответа виремия снижается, наступает сероконверсия и длительная бессимптомная фаза, которая может продолжаться годами. Для этого периода характерен невысокий уровень персистирующей виремии и постепенное снижение CD4+ лимфоцитов, которое при отсутствии лечения приводит к развитию оппортунистических инфекций и СПИД-ассоциированных заболеваний.

Стандартная диагностика ВИЧ-инфекции строится на двухэтапном серологическом алгоритме: скрининг комбинированным тестом четвёртого поколения (одновременное определение антител к ВИЧ-1/2 и антигена p24), при положительном результате — подтверждение иммуноблотом или дифференцирующим тестом. Серологические методы имеют принципиальное ограничение — «серологическое окно»: для комбинированных тестов четвёртого поколения оно составляет в среднем 18–45 дней, для тестов третьего поколения (только антитела) — в среднем 23–90 дней. РНК ВИЧ появляется в крови раньше всех других маркёров — в среднем через 10–33 дня после контакта, опережая антиген p24 и тем более антитела, что делает ПЦР наиболее ранним методом выявления инфекции. Результат исследования: «обнаружено» или «не обнаружено». Аналитическая чувствительность — 80 МЕ/мл. Специфичность — 100%.

Клиническое значение

Определение РНК ВИЧ-1 методом ПЦР в качественном формате применяется для подтверждения или исключения инфекции в ситуациях, когда серологические методы недостаточны или неинформативны. Основная область применения — диагностика острой (ранней) ВИЧ-инфекции в периоде серологического окна, когда антитела ещё не определяются или дают сомнительный результат, а виремия уже достигает высоких значений и пациент наиболее заразен. Обнаружение РНК ВИЧ-1 при отрицательном или неопределённом серологическом тесте является наиболее убедительным лабораторным доказательством острой инфекции. Ранняя диагностика критически важна: немедленное начало АРТ улучшает долгосрочный прогноз и снижает риск дальнейшей передачи. ПЦР также применяется при неопределённых результатах иммуноблота — обнаружение РНК подтверждает инфекцию, отсутствие — свидетельствует о ложноположительном скрининговом результате.

Отдельная важная область — диагностика ВИЧ-инфекции у детей, рождённых от ВИЧ-положительных матерей. Материнские антитела (IgG) передаются трансплацентарно и циркулируют у ребёнка до 18 месяцев, делая серологию неинформативной, поэтому основным методом ранней диагностики перинатальной ВИЧ-инфекции является определение нуклеиновых кислот вируса. ПЦР применяется и при скрининге донорской крови для выявления инфекции в серологическом окне — РНК ВИЧ является оптимальным маркёром для этой задачи, поскольку появляется раньше всех остальных и быстро достигает высокой концентрации.

Качественная ПЦР предназначена для диагностики — подтверждения или исключения инфекции. Для мониторинга течения заболевания и оценки эффективности АРТ используется количественное определение РНК ВИЧ (вирусная нагрузка) — отдельное исследование, которое измеряет концентрацию вируса в копиях/мл и выполняется регулярно на протяжении всего периода лечения. Для рутинного скрининга на ВИЧ используются серологические тесты (ИФА/ИХЛА четвёртого поколения), а не ПЦР.

Ограничения

ПЦР не является методом первой линии для рутинного скрининга на ВИЧ. Для скрининга используются серологические тесты (комбинированные тесты четвёртого поколения на антитела + антиген p24). Качественная ПЦР назначается в конкретных клинических ситуациях, описанных выше. 
Тест определяет только ВИЧ-1 (субтипы групп M, O, N, P). ВИЧ-2 данной тест-системой не выявляется. При подозрении на ВИЧ-2 (эпидемиологический анамнез — Западная Африка) необходимо назначить специфическое исследование. 
Отрицательный результат не исключает ВИЧ-инфекцию. При обследовании в первые недели после контакта результат может быть отрицательным, поскольку виремия ещё не достигла уровня, выявляемого тестом. Отрицательный результат ПЦР в ранние сроки после предполагаемого контакта не исключает инфекцию и при сохраняющемся подозрении требует повторного тестирования. У пациентов на эффективной АРТ вирусная нагрузка подавлена до неопределяемого уровня — это не означает отсутствие инфекции, а свидетельствует об эффективности лечения. 
Низкоуровневый положительный результат (менее 1000 копий/мл) при отрицательной серологии требует осторожной интерпретации: в редких случаях возможен ложноположительный результат. Положительный результат ПЦР должен быть подтверждён повторным исследованием или последующей сероконверсией. 
Диагноз ВИЧ-инфекции не устанавливается на основании одного лабораторного результата. Факт инфицирования устанавливается врачом-инфекционистом на основании совокупности эпидемиологических, клинических и лабораторных данных. Результаты исследования на ВИЧ являются конфиденциальными и сообщаются пациенту лично.