Инбиофлор. Обнаружение Candida albicans и типирование кандидозных грибов, методом ПЦР

Анализ представляет собой комплексное молекулярное исследование для полной этиологической диагностики кандидоза урогенитального тракта методом ПЦР, охватывающее весь объём молекулярной диагностики кандидоза в одном обследовании. Биоматериал — вагинальное отделяемое у женщин, получаемое соскобом или тампоном со стенки влагалища. Исследование включает восемь показателей: скрининговый тест на общую ДНК дрожжеподобных грибов рода Candida (Fungi), устанавливающий факт их присутствия в биоценозе; видоспецифический тест на C. albicans — наиболее частого возбудителя вульвовагинального кандидоза; и видоспецифические тесты на шесть значимых видов Candida, отличных от C. albicans, — C. krusei, C. glabrata, C. parapsilosis, C. tropicalis, C. famata, C. guilliermondii. Результат по каждому показателю выдаётся раздельно в формате обнаружено / не обнаружено; при обнаружении может указываться комментарий о превышении диагностического порога, например более 10^3 копий в пробе. Комплексный формат исследования обеспечивает полную этиологическую верификацию кандидоза — от установления грибковой составляющей биоценоза до видовой идентификации возбудителя — в одном обследовании, без необходимости последовательных дополнительных тестов.

Род Candida — обширная группа дрожжеподобных грибов, значимых при урогенитальной инфекции. C. albicans является основным возбудителем вульвовагинального кандидоза, вызывая по разным эпидемиологическим данным от 80 до 90 процентов случаев этой инфекции в большинстве популяций. Остальные случаи приходятся на виды Candida, отличные от C. albicans, наиболее значимы среди которых C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis и ряд более редких видов. Эта группа имеет принципиально иной профиль: чаще связана с хроническим рецидивирующим течением и атипичными проявлениями. Настоящее исследование покрывает шесть наиболее значимых видов этой группы, обеспечивая охват подавляющего большинства актуальных возбудителей кандидоза. 
Шесть видов Candida, отличных от C. albicans, составляющих панель, имеют различающиеся профили. Candida glabrata — наиболее частый возбудитель среди этой группы, устойчиво связанный с часто повторяющимся и хроническим течением вульвовагинального кандидоза. Candida krusei — возбудитель, выявление которого имеет значение в связи с особенностями выбора терапии. Candida parapsilosis — значимый возбудитель инвазивных форм кандидоза, поражений кожи и ногтей, внутрибольничных инфекций; в урогенитальной локализации встречается реже других видов панели. Candida tropicalis имеет широкий спектр проявлений — от поверхностных инфекций до инвазивных форм у иммунокомпрометированных пациентов. Candida famata (Debaryomyces hansenii в современной таксономии) и Candida guilliermondii (Meyerozyma guilliermondii) — более редкие возбудители с повышенной частотой у иммунокомпрометированных пациентов. 
Биологически C. albicans и другие виды Candida — условные патогены, присутствующие в микрофлоре урогенитального тракта у значительной доли здоровых женщин в небольших количествах. Развитие выраженного вульвовагинального кандидоза происходит при нарушении баланса микрофлоры, ослаблении местных защитных механизмов, изменении гормонального фона, на фоне антибактериальной терапии, при сахарном диабете, иммуносупрессии и ряде других предрасполагающих состояний. Картина вульвовагинального кандидоза характеризуется зудом и жжением в области наружных половых органов, творожистыми выделениями из влагалища, покраснением и отёчностью слизистой, болезненностью при половых контактах, при выраженном воспалении — жжением и болью при мочеиспускании. Типичная картина в большинстве случаев связана с C. albicans; нетипичное, часто повторяющееся или не отвечающее на стандартную терапию течение чаще связано с видами Candida, отличными от C. albicans.

Диагностика вульвовагинального кандидоза строится на сочетании врачебного осмотра, микроскопии вагинального отделяемого и, при соответствующих показаниях, культурального или молекулярного исследования с видовой идентификацией возбудителя. Микроскопия выявляет дрожжевые клетки и псевдогифы в нативном или окрашенном препарате и обеспечивает быстрый ориентировочный ответ, однако не даёт видовой идентификации. Культуральное исследование — референсный метод видовой диагностики Candida, его ограничения — время получения результата и меньшая чувствительность при предшествующей противогрибковой терапии. Молекулярная диагностика обеспечивает быстрый ответ, высокую чувствительность и её сохранение при малом количестве возбудителя в пробе или при предшествующей терапии. Комплексное исследование с одновременной оценкой всех значимых возбудителей кандидоза — практичный и информативный инструмент полной молекулярной диагностики.

ПЦР выявляет ДНК грибов рода Candida — в скрининговом компоненте на уровне рода, в видоспецифических компонентах на уровне каждого из семи видов, включённых в исследование. Метод не зависит от жизнеспособности возбудителя, сохраняет чувствительность при малом количестве клеточного материала и при предшествующей противогрибковой терапии.

Клиническое значение

Основной сценарий применения исследования — полная этиологическая диагностика вульвовагинального кандидоза у пациентки с признаками инфекции, когда требуется подтверждение грибковой природы заболевания и установление видовой принадлежности возбудителя. Комплексный характер исследования обеспечивает одновременное решение двух ключевых диагностических задач молекулярной диагностики кандидоза — установление факта грибковой составляющей биоценоза и видовую идентификацию возбудителя — в рамках одного забора пробы, без необходимости последовательных дополнительных тестов.

Исследование особенно ценно в ситуациях, требующих развёрнутой видовой диагностики с самого начала обследования. К таким ситуациям относятся часто повторяющийся вульвовагинальный кандидоз (четыре и более эпизодов в год), течение, не отвечающее на стандартную терапию, атипичная картина заболевания, обследование иммунокомпрометированных пациенток — с ВИЧ-инфекцией при глубоком снижении CD4+, после трансплантации, на фоне иммуносупрессивной терапии, — у которых кандидозные инфекции чаще вызываются видами Candida, отличными от C. albicans, и чаще протекают атипично. При этом тест применим и в первичной диагностике неосложнённых форм вульвовагинального кандидоза, когда ситуация требует этиологической верификации.

Положительный результат у пациентки с соответствующей картиной заболевания служит этиологическим подтверждением вульвовагинального кандидоза и, при выявлении возбудителя на уровне вида, обеспечивает видовую верификацию, имеющую прямые последствия для выбора терапевтической тактики. Выбор конкретной схемы терапии определяется лечащим врачом с учётом картины заболевания, характера течения кандидоза, выявленного возбудителя и действующих клинических рекомендаций.

Отрицательный результат по скрининговому тесту на Fungi снижает вероятность участия грибов рода Candida в развитии симптомов и направляет диагностический поиск на другие возможные причины клинической картины — бактериальный вагиноз, аэробный вагинит, трихомонадную инфекцию, неинфекционные причины вульвовагинального дискомфорта.

Ограничения

Метод ПЦР выявляет ДНК возбудителя и не говорит о его жизнеспособности. Исследование охватывает C. albicans и шесть значимых видов Candida, отличных от C. albicans, — C. krusei, C. glabrata, C. parapsilosis, C. tropicalis, C. famata, C. guilliermondii, — покрывая подавляющее большинство актуальных возбудителей кандидоза; более редкие виды рода Candida, не включённые в панель, и другие дрожжеподобные грибы не детектируются. При положительном скрининговом тесте и отрицательных результатах на все семь видоспецифических показателей у пациентки с установленной картиной кандидоза возможно участие редкого возбудителя, требующего дополнительных методов идентификации. Качественный формат теста не даёт количественной оценки содержания возбудителя в пробе — параметра, значимого при оценке роли грибковой находки и разграничении выраженной инфекции и бессимптомного присутствия. Обнаружение Candida само по себе не всегда равнозначно выраженному кандидозу: грибы рода Candida могут присутствовать как часть факультативной микрофлоры у здоровых женщин, и интерпретация находки строится с учётом картины заболевания и данных микроскопии. На чувствительность метода влияет предшествующая системная или местная противогрибковая терапия, снижающая количество возбудителя в пробе; применение антисептиков и интравагинальных препаратов непосредственно перед забором материала также уменьшает концентрацию грибов в пробе. Результат исследования требует интерпретации врачом — гинекологом, дерматовенерологом — с учётом картины заболевания, данных микроскопии, характера течения кандидоза, иммунного статуса пациентки и общей ситуации.