Инбиофлор. ПЦР-диагностика дрожжеподобных грибов (Fungi) и Candida albicans

Анализ представляет собой двухкомпонентное молекулярное исследование методом ПЦР, направленное на скрининговую диагностику кандидоза урогенитального тракта и одновременное выявление его наиболее частого возбудителя. Биоматериал — вагинальное отделяемое у женщин, получаемое соскобом или тампоном со стенки влагалища. Исследование включает два показателя: скрининговый показатель Fungi, используемый в панели диагностики кандидоза для выявления ДНК дрожжеподобных грибов, и видоспецифический тест на C. albicans — основного возбудителя вульвовагинального кандидоза. Результат по каждому показателю выдаётся раздельно в формате обнаружено / не обнаружено; при обнаружении может указываться комментарий о превышении диагностического порога, например более 10^3 копий в пробе.

Исследование занимает первый этап поэтапного молекулярного подхода к диагностике кандидоза. Его клиническая задача — выявить присутствие дрожжеподобных грибов в биоценозе и одновременно проверить на C. albicans как наиболее частого возбудителя. Такой формат удобен в ситуациях, когда клиническая картина позволяет предполагать типичную форму вульвовагинального кандидоза и полной видовой идентификации возбудителей, отличных от C. albicans, на первом этапе обследования не требуется. При положительном скрининговом показателе и отрицательном результате на C. albicans дальнейшая видовая идентификация выполняется отдельным исследованием — панелью на виды Candida, отличные от C. albicans.

Род Candida — обширная группа дрожжеподобных грибов, значимых при урогенитальной инфекции. C. albicans вызывает по разным эпидемиологическим данным от 80 до 90 процентов случаев вульвовагинального кандидоза в большинстве популяций, что делает её целенаправленное видоспецифическое тестирование обоснованным первым видовым шагом диагностики. Остальные случаи приходятся на виды Candida, отличные от C. albicans, — прежде всего C. glabrata, реже C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis и другие представители рода, — имеющие существенно иные клинические профили. Именно это распределение определяет рациональность поэтапного подхода: сначала проверка на дрожжеподобные грибы в целом и на C. albicans как наиболее частый вид, затем при необходимости — развёрнутая диагностика на виды, отличные от C. albicans. 
Биологически C. albicans — условный патоген, существующий в организме человека одновременно в двух формах: дрожжевой (почкующиеся клетки) и мицелиальной (образование псевдогифов и истинных гифов, обеспечивающее инвазию в ткани). Переход между формами — ключевой механизм развития инфекции. C. albicans присутствует как часть нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта и в небольших количествах — в микрофлоре урогенитального тракта у значительной доли здоровых женщин. Развитие выраженного вульвовагинального кандидоза происходит при нарушении баланса микрофлоры, ослаблении местных защитных механизмов, изменении гормонального фона, на фоне антибактериальной терапии, при сахарном диабете, иммуносупрессии и ряде других предрасполагающих состояний. 
Картина вульвовагинального кандидоза характеризуется зудом и жжением в области наружных половых органов, творожистыми выделениями из влагалища, покраснением и отёчностью слизистой, болезненностью при половых контактах, при выраженном воспалении — жжением и болью при мочеиспускании. Типичная картина в большинстве случаев связана с C. albicans, что поддерживает клиническую логику настоящего исследования: при классической симптоматике целенаправленное тестирование на C. albicans обычно обеспечивает этиологическое уточнение. 
Диагностика вульвовагинального кандидоза строится на сочетании врачебного осмотра, микроскопии вагинального отделяемого и, при соответствующих показаниях, культурального или молекулярного исследования с видовой идентификацией возбудителя. Микроскопия выявляет дрожжевые клетки и псевдогифы в нативном или окрашенном препарате и обеспечивает быстрый ориентировочный ответ, однако не даёт видовой идентификации. Культуральное исследование — референсный метод видовой диагностики Candida, его ограничения — время получения результата и меньшая чувствительность при предшествующей противогрибковой терапии. Молекулярная диагностика обеспечивает быстрый ответ и высокую чувствительность, которая сохраняется при малом количестве возбудителя в пробе или при предшествующей терапии.

ПЦР выявляет ДНК дрожжеподобных грибов в скрининговом компоненте и ДНК C. albicans в видоспецифическом компоненте. Метод не зависит от жизнеспособности возбудителя, сохраняет чувствительность при малом количестве клеточного материала и при предшествующей противогрибковой терапии.

Клиническое значение

Основной сценарий применения исследования — этиологическое уточнение при вульвовагинальном кандидозе у пациентки с признаками инфекции. Исследование обеспечивает одновременную проверку на присутствие дрожжеподобных грибов в биоценозе и на участие в клинической картине C. albicans как наиболее частого возбудителя. Формат удобен в ведении типичных форм вульвовагинального кандидоза, когда картина согласуется с инфекцией, вызванной C. albicans, и полная видовая идентификация возбудителей, отличных от C. albicans, на первом этапе обследования не является приоритетом. В случаях, требующих развёрнутой видовой диагностики с самого начала — при часто повторяющемся течении, при течении, не отвечающем на стандартную терапию, при атипичной картине, при обследовании иммунокомпрометированных пациенток, — целесообразно применение полного комплексного исследования, охватывающего одновременно C. albicans и виды Candida, отличные от C. albicans.

Положительные результаты по обоим компонентам у пациентки с соответствующей картиной заболевания поддерживают диагноз вульвовагинального кандидоза, вызванного C. albicans, и обосновывают назначение противогрибковой терапии по действующим клиническим рекомендациям. Выбор конкретной схемы определяется лечащим врачом с учётом картины заболевания и характера течения кандидоза. При отсутствии симптоматики выявление Candida не является показанием к лечению: возбудитель может присутствовать как часть факультативной микрофлоры у здоровых женщин.

Положительный скрининговый показатель при отрицательном результате на C. albicans указывает на участие в инфекции вида Candida, отличного от C. albicans. В такой ситуации диагностика продолжается отдельным исследованием — панелью на виды Candida, отличные от C. albicans, обеспечивающей видовую идентификацию возбудителя и поддерживающей выбор адекватной противогрибковой терапии.

Отрицательный скрининговый показатель снижает вероятность участия дрожжеподобных грибов в развитии симптомов и направляет диагностический поиск на другие возможные причины клинической картины — бактериальный вагиноз, аэробный вагинит, трихомонадную инфекцию, неинфекционные причины вульвовагинального дискомфорта.

Ограничения

Метод ПЦР выявляет ДНК возбудителя и не говорит о его жизнеспособности. Исследование направлено видоспецифически на C. albicans и на уровне скринингового показателя — на присутствие дрожжеподобных грибов в биоценозе; другие виды рода Candida — C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis и более редкие — индивидуально не идентифицируются. При положительном скрининговом показателе и отрицательном результате на C. albicans для видовой идентификации возбудителя выполняется отдельное исследование на виды Candida, отличные от C. albicans. Качественный формат теста не даёт количественной оценки содержания возбудителя в пробе — параметра, значимого при оценке роли грибковой находки и разграничении выраженной инфекции и бессимптомного присутствия. Обнаружение Candida само по себе не всегда равнозначно выраженному кандидозу: грибы рода Candida могут присутствовать как часть факультативной микрофлоры у здоровых женщин, и интерпретация находки строится с учётом картины заболевания и данных микроскопии. На чувствительность метода влияет предшествующая системная или местная противогрибковая терапия, снижающая количество возбудителя в пробе; применение антисептиков и интравагинальных препаратов непосредственно перед забором материала также уменьшает концентрацию грибов в пробе. Результат исследования требует интерпретации врачом — гинекологом, дерматовенерологом — с учётом картины заболевания, данных микроскопии, характера течения кандидоза и общей ситуации.