Для врача 
Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование при диагностике лимфопролиферативных заболеваний, парафиновый блок
Информация об исследовании
Что такое Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование: диагностика лимфопролиферативных заболеваний (биоматериал, заключенный в парафиновый блок)
Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) представляет собой высокоточный метод морфологической диагностики, основанный на выявлении специфических белковых молекул (антигенов) в клетках и тканях с помощью меченых антител. При диагностике лимфопролиферативных заболеваний этот метод является незаменимым инструментом, поскольку морфологически различные типы лимфом и лейкозов нередко выглядят схожим образом при обычном гистологическом окрашивании. Проще говоря, ИГХ позволяет «расшифровать» биологический портрет опухолевых клеток и точно определить, к какому типу относится новообразование.
Биоматериалом для исследования служит ткань, фиксированная в формалине и заключённая в парафиновый блок. Это может быть биоптат лимфатического узла, селезёнки, костного мозга, миндалин, кожи или другого органа, поражённого патологическим процессом. Парафиновая заливка обеспечивает длительную сохранность тканевой архитектуры и антигенных детерминант, что даёт возможность проводить исследование даже спустя значительное время после забора материала. На тонких срезах парафинового блока последовательно применяется панель антител, каждое из которых распознаёт определённый маркер на поверхности или внутри клетки. Результатом становится характерный иммунофенотипический профиль, позволяющий классифицировать опухоль согласно действующей классификации Всемирной организации здравоохранения.
Клиническое значение
Лимфопролиферативные заболевания объединяют обширную и крайне разнородную группу опухолей, происходящих из клеток лимфоидной ткани. Сюда относятся различные варианты неходжкинских лимфом (диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома, фолликулярная лимфома, лимфома из клеток мантийной зоны, лимфома Беркитта, периферические Т-клеточные лимфомы и многие другие), классическая лимфома Ходжкина, а также хронические лимфопролиферативные процессы. Каждая из этих нозологий требует принципиально различных терапевтических подходов, и именно ИГХ исследование обеспечивает их надёжную дифференциальную диагностику.
При проведении иммуногистохимического исследования оценивается экспрессия широкого спектра маркеров. Среди них: маркеры В-клеточной линии (CD20, CD79a, PAX5), Т-клеточной линии (CD3, CD5, CD7), маркеры фолликулярного происхождения (CD10, BCL6), активационные и пролиферативные антигены (Ki-67, MUM1), а также ряд специфических молекул, таких как циклин D1, BCL2, CD30, CD15, ALK и другие. Комбинация положительных и отрицательных результатов формирует уникальный иммунофенотип, по которому патоморфолог устанавливает точный диагноз. Например, одновременная экспрессия CD30 и CD15 при отсутствии общего лейкоцитарного антигена CD45 характерна для клеток Рид-Штернберга при лимфоме Ходжкина.
Помимо верификации диагноза, иммуногистохимическое исследование при лимфопролиферативных заболеваниях помогает определить прогностические факторы. Уровень пролиферативной активности по Ki-67, принадлежность к определённому молекулярному подтипу (GCB или non-GCB при диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфоме), экспрессия отдельных онкопротеинов — всё это напрямую влияет на выбор схемы лечения и прогноз для пациента. Таким образом, ИГХ выполняет не только диагностическую, но и стратификационную функцию.
Ограничения метода
Несмотря на высокую информативность, иммуногистохимическое исследование лимфопролиферативных заболеваний имеет ряд объективных ограничений, которые следует учитывать при интерпретации результатов. Качество фиксации ткани играет критическую роль: избыточное или недостаточное пребывание материала в формалине способно привести к утрате антигенной реактивности, что искажает картину экспрессии маркеров. Также значение имеет объём представленного биоматериала — малое количество диагностически значимой ткани может не позволить провести полную панель антител.
ИГХ исследование всегда интерпретируется в совокупности с данными стандартного гистологического анализа, клинической картиной и результатами дополнительных методов. В ряде диагностически сложных случаев может потребоваться молекулярно-генетическое исследование (FISH, ПЦР) для выявления характерных хромосомных транслокаций или клональных перестроек генов иммуноглобулинов и Т-клеточного рецептора. Иммуногистохимия не заменяет эти методы, но является обязательным этапом диагностического алгоритма. Окончательное заключение формулирует врач-патоморфолог с учётом всей совокупности полученных данных.
Когда назначают анализ
- Верификация типа лимфомы при выявлении опухолевого поражения лимфатических узлов, селезёнки или экстранодальных органов по данным гистологического исследования
- Дифференциальная диагностика лимфопролиферативных заболеваний — разграничение ходжкинских и неходжкинских лимфом, а также их подтипов, что критически важно для выбора схемы терапии
- Определение иммунофенотипа опухолевых клеток (принадлежность к В-клеточной, Т-клеточной или NK-клеточной линии) при подозрении на лимфому по результатам биопсии
- Подозрение на хронический лимфолейкоз или лимфому из малых лимфоцитов при обнаружении лимфоидной инфильтрации в биопсийном материале
- Диагностика диффузной В-крупноклеточной лимфомы и определение её молекулярного подтипа (GCB или non-GCB) с помощью ИГХ-исследования по алгоритму Hans
- Подтверждение или исключение лимфомы Ходжкина при наличии атипичных крупных клеток в биоптате лимфатического узла, в том числе идентификация клеток Рид — Штернберга
- Дифференциальная диагностика реактивной лимфоидной гиперплазии и злокачественного лимфопролиферативного процесса — разграничение доброкачественного увеличения лимфоузлов от лимфомы
- Диагностика фолликулярной лимфомы с оценкой экспрессии маркёров BCL-2, CD10 и BCL-6 в материале, заключённом в парафиновый блок
- Подозрение на лимфому из клеток мантийной зоны с определением экспрессии циклина D1 при ИГХ-исследовании биопсийного материала
- Уточнение диагноза при экстранодальных лимфомах (поражение желудочно-кишечного тракта, кожи, ЦНС, лёгких и других органов), когда морфологическая картина неоднозначна
- Определение индекса пролиферативной активности опухоли (Ki-67) для оценки агрессивности лимфопролиферативного заболевания и прогноза течения
- Диагностика посттрансплантационных лимфопролиферативных расстройств (ПТЛР) у пациентов после трансплантации органов или костного мозга
- Иммуногистохимическое исследование при подозрении на множественную миелому или плазмоцитому с оценкой экспрессии CD138, каппа- и лямбда-лёгких цепей иммуноглобулинов
- Пересмотр и верификация ранее установленного диагноза лимфомы при направлении пациента в специализированный онкогематологический центр или перед началом специфической терапии
- Мониторинг остаточной опухолевой ткани в повторных биопсиях после проведённого лечения лимфопролиферативного заболевания для оценки полноты ремиссии
Как подготовиться к анализу
Иммуногистохимическое исследование для диагностики лимфопролиферативных заболеваний проводится на биологическом материале, который уже зафиксирован и заключён в парафиновый блок. Это означает, что этап взятия ткани (биопсия) уже позади, а подготовка касается прежде всего правильного обращения с готовым образцом. Тем не менее существуют важные требования, соблюдение которых обеспечит достоверность результата.
Общие требования:
- Для исследования необходимо предоставить парафиновый блок с биоматериалом, полученным при биопсии лимфатического узла, костного мозга или другой ткани, в которой подозревается лимфопролиферативный процесс.
- Вместе с блоком желательно передать готовые гистологические стёкла, окрашенные гематоксилином и эозином, а также копию имеющегося гистологического заключения.
- Парафиновый блок должен быть промаркирован: на нём указывается фамилия пациента, номер и дата биопсии. Убедитесь, что маркировка читаема.
- Специальной подготовки пациента в день сдачи материала не требуется, поскольку исследование выполняется на ранее заготовленном образце.
Диета:
- Диетические ограничения для данного вида исследования не предусмотрены. Анализ проводится на тканевом образце, и характер питания пациента не влияет на его результат.
Лекарственные препараты:
- Если пациент получает или ранее получал химиотерапию, таргетную терапию, глюкокортикостероиды или иммуносупрессивные препараты, необходимо сообщить об этом лечащему врачу и указать в направлении. Эти сведения могут быть важны для корректной интерпретации иммуногистохимического профиля опухоли.
- Отмена текущей лекарственной терапии перед передачей блока в лабораторию не требуется.
Другие ограничения:
- Ограничения по физической активности, курению и употреблению алкоголя для данного исследования отсутствуют, так как оно не связано с забором крови или иных жидких биосред.
- Парафиновый блок следует транспортировать при комнатной температуре, не допуская нагревания выше 40 °C, прямого солнечного света и механических повреждений. Избыточное тепло способно деформировать парафин и повредить ткань внутри него.
- Обратите внимание: чем раньше после первичного гистологического исследования будет выполнено ИГХ, тем выше качество реакции с антителами. Длительное хранение блока может снижать иммунореактивность ткани.
Стоимость исследования
биоматериала 0 ₽