Иммуногистохимическое исследование экспрессии белка p16INK4a представляет собой высокоинформативный метод молекулярной диагностики, применяемый для выявления диспластических и неопластических изменений в эпителиальных тканях, в первую очередь — при поражениях шейки матки, пищевода, аногенитальной области, ротоглотки и других анатомических зон, ассоциированных с инфекцией высокоонкогенных типов вируса папилломы человека (ВПЧ).
Белок p16INK4a является ингибитором циклин-зависимой киназы 4, регулирующим переход клетки из фазы G1 в S-фазу клеточного цикла. В нормальных условиях его экспрессия минимальна. Однако при вирусной трансформации клеток, вызванной экспрессией онкопротеина E7 ВПЧ высокого онкогенного риска, происходит инактивация ретинобластомного белка (pRb), что запускает вторичную компенсаторную гиперэкспрессию p16INK4a. Именно этот механизм лежит в основе использования p16 в качестве надёжного суррогатного маркера вирус-индуцированных предраковых состояний и раннего рака.
Исследование проводится на гистологических срезах из парафиновых блоков, полученных из биопсийного или операционного материала, предварительно фиксированного в нейтральном формалиновом растворе. После депарафинизации и антигенной рекуперации, срезы инкубируют с моноклональными антителами к p16, а затем окрашивают с использованием систем визуализации на основе пероксидазы и хромогена DAB.
Интерпретация результатов проводится с учетом локализации и интенсивности окрашивания. При положительном результате наблюдается диффузное, интенсивное ядерно-цитоплазматическое окрашивание эпителиальных клеток. Такой характер окрашивания считается признаком трансформирующей ВПЧ-инфекции и ассоциируется с высоким риском прогрессии дисплазии в инвазивную карциному. В отличие от этого, очаговое или слабое окрашивание может встречаться при реактивных изменениях или дисплазии низкой степени.