Определение пролиферативной активности опухолевых и неоантроплазированных клеток с помощью иммуногистохимической оценки экспрессии белка Ki-67 является важнейшим этапом морфологической диагностики и прогностической стратификации ряда заболеваний, особенно онкологических. Белок Ki-67 представляет собой ядерный не-гистоновый антиген, экспрессируемый исключительно в фазах активного клеточного цикла (G1, S, G2 и митоз), но отсутствующий в состоянии покоя (фаза G0). Поэтому он служит универсальным маркером клеточной пролиферации.
Исследование выполняется на парафиновых срезах тканей, предварительно фиксированных в нейтральном формалиновом буфере (10% формалин), что обеспечивает сохранность морфологии и антигенных эпитопов. После стандартной процедуры депарафинизации и рекуперации антигенов (обычно с использованием буфера цитрата натрия с нагреванием), проводится инкубация с первичным моноклональным антителом к Ki-67. Далее применяются визуализирующие системы на основе пероксидаз или флюоресцентных меток, что позволяет оценить наличие и степень окрашивания ядер клеток.
Результаты интерпретируются количественно: определяется процент клеток, положительных по Ki-67, от общего числа ядер в изучаемом поле зрения. Этот показатель называется индексом пролиферативной активности (Ki-67 labeling index). В разных органах и при различных патологиях существуют свои пороговые значения этого индекса, имеющие клинико-диагностическое и прогностическое значение.
Например:
В диагностике нейроэндокринных опухолей ЖКТ и поджелудочной железы Ki-67 является критерием градации опухоли:
G1 — индекс менее 3%;
G2 — от 3 до 20%;
G3 — более 20%.
В раке молочной железы уровень экспрессии Ki-67 >20–30% указывает на агрессивное течение опухоли и влияет на выбор химиотерапевтической тактики.
В глиомах головного мозга высокая экспрессия Ki-67 коррелирует с низкой степенью дифференцировки и неблагоприятным прогнозом.
В лимфомах уровень Ki-67 помогает различить индолентные и агрессивные формы заболевания.
Оценка проводится либо вручную (визуальный подсчёт под микроскопом в наиболее активно окрашенных зонах — так называемых "hot spots"), либо с использованием цифровых морфометрических технологий, повышающих точность и воспроизводимость результата.
Таким образом, определение экспрессии Ki-67 представляет собой надёжный, воспроизводимый и клинически значимый метод оценки клеточной активности, позволяющий судить о биологическом потенциале новообразования, прогнозе заболевания и целесообразности применения пролиферативно-направленных терапий.