Антитела IgM к бледной трепонеме (Treponema pallidum) в крови методом иммуноблоттинга

Тест определяет в крови антитела класса IgM к отдельным структурным белкам бледной трепонемы (Treponema pallidum), возбудителя сифилиса, методом иммуноблоттинга. В отличие от стандартного ИФА, выявляющего реактивность IgM к смеси трепонемных антигенов без разделения по отдельным антигенам, иммуноблоттинг позволяет раздельно оценить наличие специфических IgM против каждого из ключевых белков возбудителя. Это повышает специфичность определения IgM по сравнению со стандартными иммуноферментными методами, что используется как уточняющий тест при сомнительных или подозрительных на ложноположительный результат IgM в стандартном ИФА или ИХЛА анализе. Уточнение может применяться у пациентов с факторами риска перекрёстных реакций (системная красная волчанка, антифосфолипидный синдром, ревматоидный фактор, поликлональная активация при острых вирусных инфекциях), при подозрении на свежий первичный сифилис у пациентов с типичной клинической картиной и противоречивыми результатами скрининговой серологии, в отдельных ситуациях при подозрении на врождённый сифилис у новорождённых при противоречивых данных стандартной серологии. Иммуноблоттинг для определения специфических IgM к Treponema pallidum использует отдельные рекомбинантные трепонемные белки, выступающие в роли иммунодоминантных антигенов: TpN15, TpN17, TpN44.5 (TmpA), TpN47 и ряд дополнительных белков. Антитела класса IgM, присутствующие в исследуемой сыворотке, связываются с соответствующими антигенными полосами на мембране. 

Возбудителем сифилиса является бактерия Treponema pallidum семейства Spirochaetaceae. Это спирохета — спиральной формы бактерия с подвижностью за счёт эндофлагелл, не культивируемая в стандартных бактериологических средах. Возбудитель чувствителен к высушиванию, нагреванию и большинству дезинфицирующих средств, во внешней среде быстро погибает. Естественным хозяином является только человек. Передача происходит преимущественно половым путём при незащищённых половых контактах с инфицированным партнёром в стадии первичного, вторичного или раннего скрытого сифилиса; реже — вертикально от матери к плоду через плаценту с развитием врождённого сифилиса, через препараты крови и компоненты крови от инфицированных доноров. 
Сифилис — системное инфекционное заболевание со стадийным течением и широким спектром клинических проявлений. Инкубационный период составляет 10–90 дней, в среднем 3 недели. Клинические формы заболевания включают первичный сифилис с твёрдым шанкром в месте внедрения возбудителя и регионарной лимфаденопатией, вторичный сифилис с генерализованными пятнисто-папулёзными высыпаниями, широкими кондиломами и поражением слизистых, скрытый сифилис без клинических проявлений, третичный сифилис с гуммозным поражением кожи, костей, внутренних органов, кардиоваскулярным сифилисом, нейросифилисом, а также врождённый сифилис при трансплацентарной передаче от матери к плоду. Нейросифилис может развиваться на любой стадии заболевания.

Антитела класса IgM к бледной трепонеме появляются в крови через 2–4 недели после инфицирования и представляют первую волну гуморального ответа на острое первичное инфицирование. Уровень IgM достигает максимума на 6–9-й неделе от заражения, после чего постепенно снижается; у нелеченых пациентов IgM могут сохраняться при персистирующей инфекции, у пациентов после успешного специфического лечения — снижаются и обычно исчезают через несколько месяцев. У части пациентов с длительно текущим скрытым сифилисом IgM могут отсутствовать, что ограничивает чувствительность теста при поздних формах; при повторных инфекциях у ранее болевших и леченых пациентов чувствительность IgM также снижена за счёт ослабленного первичного ответа на фоне сформированной иммунной памяти. Определение IgM в стандартный алгоритм диагностики сифилиса не входит и применяется как дополнительный метод в специальных клинических ситуациях; иммуноблоттинг IgM применяется как уточняющий тест с повышенной специфичностью при сомнительных результатах стандартных тестов на IgM.

Клиническое значение

При получении положительного или сомнительного результата стандартного иммуноферментного или иммунохемилюминесцентного анализа на IgM у пациента без типичной клинической картины свежего сифилиса иммуноблоттинг применяется как уточняющий метод для разграничения истинно положительного результата и ложноположительной реакции в стандартном тесте. Стандартные иммуноферментные тест-системы на IgM имеют ограниченную специфичность за счёт перекрёстной реактивности с антителами при системной красной волчанке, антифосфолипидном синдроме, ревматоидном артрите, инфекционном мононуклеозе, инфекциях герпесвирусной группы и других состояний с поликлональной активацией иммунной системы. Иммуноблоттинг с раздельным выявлением антител к отдельным иммунодоминантным трепонемным белкам обладает более высокой специфичностью: положительный результат подтверждает специфичность IgM-реакции и снижает вероятность ложноположительного результата за счёт перекрёстных реакций, а реактивность только к одному антигену или к второстепенным белкам трактуется как сомнительный результат, требующий повторного обследования или альтернативного подтверждения. Самостоятельным основанием для постановки диагноза сифилиса, оценки стадии или активности заболевания положительный результат иммуноблоттинга IgM не служит.

При подозрении на свежий первичный сифилис у пациента с твёрдым шанкром или другими клиническими проявлениями ранней инфекции и противоречивыми результатами скрининговой серологии (например, положительный IgM в стандартном иммуноферментном анализе при отрицательных или пограничных суммарных трепонемных антителах) иммуноблоттинг применяется для уточнения специфичности IgM-реакции. Положительный результат иммуноблоттинга IgM в сочетании с типичной клинической картиной снижает вероятность ложноположительного результата стандартного теста и согласуется с клиническим диагнозом свежего первичного инфицирования; самостоятельным подтверждением диагноза при отсутствии других серологических и клинических данных результат не служит. Отрицательный или сомнительный результат иммуноблоттинга при сохраняющемся клиническом подозрении не исключает диагноз и требует повторного обследования через 2–3 недели и прямого выявления возбудителя из элементов высыпаний методом микроскопии в тёмном поле или ПЦР.

При подозрении на врождённый сифилис у новорождённых от матерей с подтверждённым или подозрительным сифилисом стандарт диагностики опирается на количественный нетрепонемный тест у новорождённого с сопоставлением титра с материнским, клинико-лабораторную оценку, рентгенологическое обследование и при необходимости исследование ликвора; ни один тест на IgM не рекомендован международными клиническими рекомендациями как стандартный метод диагностики врождённого сифилиса. Иммуноблоттинг IgM может рассматриваться как дополнительный метод в отдельных диагностически сложных ситуациях для уточнения специфичности IgM-реакции у новорождённого при противоречивых результатах стандартной серологии, однако не служит самостоятельным основанием для диагноза. Решение о тактике принимается неонатологом и педиатром-инфекционистом по совокупности клинических, серологических и анамнестических данных.

Ограничения

Положительный результат иммуноблоттинга IgM подтверждает специфичность IgM-реакции, выявленной стандартным методом, однако не служит маркером стадии заболевания или активности инфекции и не используется для стадирования сифилиса, диагностики реинфекции, оценки эффективности лечения или принятия решений о длительности специфической терапии. 
При длительно текущем скрытом сифилисе и поздних формах заболевания IgM могут отсутствовать у части пациентов, что ограничивает чувствительность теста на этих стадиях. При повторных инфекциях у ранее болевших и леченых пациентов чувствительность IgM, в том числе в иммуноблоттинге, снижена за счёт ослабленного первичного ответа на фоне сформированной иммунной памяти. Отрицательный иммуноблоттинг IgM у пациента с положительными суммарными трепонемными антителами и неясной давностью инфицирования не исключает активной инфекции и не служит самостоятельным основанием для отказа от специфического лечения. 
Сомнительный результат иммуноблоттинга с реактивностью только к одному антигену или к второстепенным белкам не интерпретируется как положительный и требует повторного обследования через 2–3 недели или применения альтернативных подтверждающих методов. 
Ложноположительные результаты иммуноблоттинга IgM встречаются реже, чем в стандартном иммуноферментном анализе, однако возможны у пациентов с системными аутоиммунными заболеваниями (системная красная волчанка, антифосфолипидный синдром, ревматоидный артрит) при наличии перекрёстно реагирующих антител, у пациентов с ревматоидным фактором, при поликлональной активации иммунной системы при острых инфекционных процессах. 
Иммуноблоттинг IgM не применяется как самостоятельный скрининговый метод и используется только в составе уточняющего обследования при положительных или сомнительных результатах стандартных тестов на IgM.