Антитела IgG к хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) методом иммуноблоттинга в крови

Иммуноблоттинг применяется как подтверждающий тест после положительного или сомнительного результата стандартного скрининга на антитела к Helicobacter pylori. Скрининговый иммуноферментный анализ обладает высокой чувствительностью, но тест определяет суммарный антительный ответ против смеси антигенов возбудителя и часть его результатов оказывается ложноположительными. Иммуноблоттинг регистрирует антитела не к суммарной смеси, а к отдельным белкам возбудителя. Стандартная панель иммуноблота включает четыре белка Helicobacter pylori: уреазу, белок теплового шока HSP60, цитотоксин-ассоциированный антиген CagA и вакуолизирующий цитотоксин VacA.  
Уреаза — фермент, расщепляющий мочевину желудочного содержимого и защелачивающий среду вокруг бактерии, что обеспечивает её выживание в кислой среде желудка; уреаза присутствует у всех штаммов H. pylori. Белок теплового шока HSP60 относится к шаперонам — белкам, помогающим другим белкам бактерии приобретать правильную пространственную структуру; HSP60 также присутствует у всех штаммов. CagA, или цитотоксин-ассоциированный белок, — токсин, который часть штаммов H. pylori доставляет непосредственно в клетки слизистой желудка и тем самым усиливает воспаление и повреждение тканей. VacA, или вакуолизирующий цитотоксин, — белок, образующий в клетках слизистой пузырьки-вакуоли и повреждающий слизистый барьер. Цитотоксин-ассоциированный антиген CagA и вакуолизирующий цитотоксин VacA экспрессируются не всеми вариантами бактерии. Штаммы, продуцирующие эти белки, вызывают более агрессивное воспаление и ассоциированы с повышенным риском язвенной болезни, атрофического гастрита и аденокарциномы желудка.

H. pylori — спиралевидная грамотрицательная бактерия с жгутиками семейства Helicobacteraceae рода Helicobacter. Колонизирует слизистую желудка и двенадцатиперстной кишки, выживает в кислой среде желудка за счёт уреазной активности и подвижности, обеспечиваемой жгутиками. H. pylori отнесён IARC к Группе 1 канцерогенов и признан ведущей причиной аденокарциномы желудка дистальной локализации; с ним также связана MALT-лимфома желудка (лимфома лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой оболочкой желудка). 
Заражение происходит от человека к человеку преимущественно в детском возрасте, фекально-оральным и в меньшей степени орально-оральным путём при тесном бытовом контакте; чаще всего инфицирование наступает в семье. Распространённость инфекции значимо различается по регионам мира: в развитых странах H. pylori инфицировано приблизительно 20–40% взрослого населения с тенденцией к снижению, в развивающихся странах показатели достигают 70–80% и выше. К группам повышенного риска инфицирования и неблагоприятного течения относятся члены семей H. pylori-инфицированных лиц, лица с отягощённым семейным анамнезом по раку желудка, пациенты с верифицированными предраковыми изменениями слизистой желудка, пациенты на длительной кислотосупрессивной терапии без эрадикации возбудителя.

Клинически H. pylori-инфекция у всех инфицированных вызывает хронический гастрит, при этом клинические проявления развиваются лишь у части пациентов. Острая фаза инфекции в большинстве случаев проходит незамеченной или ограничивается кратковременной диспепсией, тошнотой и эпигастральным дискомфортом, после чего у подавляющего большинства инфицированных переходит в хроническую форму. Хронический активный гастрит клинически выражается диспепсическими жалобами, болями в эпигастрии, чувством тяжести после еды, отрыжкой, тошнотой; у значительной части пациентов протекает бессимптомно. 
Длительная нелеченая H. pylori-инфекция приводит к развитию осложнений. У 10–20% инфицированных формируется пептическая язвенная болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки. Часть пациентов проходит последовательные звенья каскада Корреа: хронический активный гастрит, атрофический гастрит, кишечная метаплазия, дисплазия эпителия и в исходе — аденокарцинома желудка дистальной локализации. С H. pylori также связано развитие MALT-лимфомы желудка. К внегастральным проявлениям H. pylori-инфекции относятся железодефицитная анемия неясного происхождения, дефицит витамина B12, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура. После успешной эрадикации возбудителя прогрессирование атрофии и метаплазии замедляется или останавливается, риск пептической язвенной болезни значительно снижается; риск аденокарциномы желудка также снижается, однако у пациентов с уже сформировавшейся атрофией и кишечной метаплазией сохраняется и требует продолжения эндоскопического наблюдения.

Клиническое значение

В первичной диагностике H. pylori-инфекции основу составляют прямые методы выявления возбудителя — уреазный дыхательный тест с мочевиной, меченной 13C, антигенный тест в кале, гистологическое и быстрое уреазное исследование биоптатов слизистой при эндоскопии. Эти методы оценивают текущую активность инфекции. Иммуноблоттинг как серологический подтверждающий метод занимает в этом алгоритме вспомогательное положение и применяется при положительных и сомнительных результатах стандартного серологического скрининга, а также для подтверждения предшествующей инфекции у пациентов с уже сниженной плотностью обсеменения слизистой (выраженная атрофия, длительная кислотосупрессивная терапия), у которых прямые методы могут давать ложноотрицательные результаты.

Дополнительно иммуноблоттинг применяется для подтверждения перенесённой или текущей инфекции у пациентов со сниженной плотностью обсеменения слизистой. У пациентов с распространённой атрофией слизистой желудка, на фоне длительной кислотосупрессивной терапии, после недавнего приёма антибактериальных препаратов, при активном желудочно-кишечном кровотечении плотность колонизации снижена, и чувствительность прямых методов диагностики падает; в такой ситуации серологическое подтверждение сохраняет диагностическое значение. 

Антитела к CagA и VacA дают дополнительную прогностическую информацию у пациентов с факторами риска H. pylori-ассоциированных заболеваний — отягощённым семейным анамнезом по раку желудка, верифицированными предраковыми изменениями слизистой, длительным язвенным анамнезом. Наличие антител к CagA и/или VacA указывает на контакт со штаммом, экспрессирующим эти факторы патогенности, и согласуется с более выраженным повреждением слизистой. Отсутствие антител к CagA и VacA не отменяет показаний к эрадикации, поскольку любой штамм H. pylori поддерживает хроническое воспаление слизистой желудка.

После курса эрадикационной терапии H. pylori контроль эффективности лечения проводится прямыми методами выявления возбудителя через 4–6 недель после завершения терапии и не ранее двух недель после отмены ингибиторов протонной помпы. Результат иммуноблоттинга после успешной эрадикации длительное время остаётся положительным за счёт сохранения IgG к ранее перенесённой инфекции и не используется для оценки эффективности лечения.

Ограничения

Иммуноблоттинг для определения IgG к Helicobacter pylori может давать ложноположительные результаты за счёт перекрёстной реактивности с антигенами других видов рода Helicobacter и близких бактерий (Campylobacter jejuni и других близких видов), при аутоиммунных заболеваниях с неспецифической поликлональной активацией иммунного ответа и при наличии в сыворотке гетерофильных антител.   
При тяжёлом иммунодефиците (ВИЧ-инфекция на стадии вторичных заболеваний, состояния после трансплантации с иммуносупрессивной терапией, гуморальный иммунодефицит) выработка антител к H. pylori может быть сниженной, отсроченной или отсутствовать, и отрицательный результат иммуноблоттинга не исключает инфекцию. У пациентов с распространённой атрофией слизистой желудка и резко сниженной плотностью обсеменения возможны сниженные уровни антител, не отражающие в полной мере историю инфекции; в этих ситуациях основу диагностики составляют гистологическое исследование биоптатов слизистой и молекулярно-генетические методы (ПЦР).