Антитела IgG к бледной трепонеме (Treponema pallidum) в крови методом иммуноблоттинга

Тест определяет в крови антитела класса IgG к отдельным структурным белкам бледной трепонемы (Treponema pallidum), возбудителя сифилиса, методом иммуноблоттинга. В отличие от стандартного иммуноферментного анализа, выявляющего реактивность IgG к смеси трепонемных антигенов без разделения по отдельным антигенам, иммуноблоттинг позволяет раздельно оценить наличие специфических IgG против каждого из ключевых белков возбудителя, что повышает специфичность определения IgG. Тест применяется как подтверждающий при дискордантных результатах в обратном алгоритме серологической диагностики (положительный трепонемный скрининг при отрицательном или сомнительном нетрепонемном тесте), при подозрении на ложноположительный результат стандартного трепонемного скрининга у пациентов с факторами риска перекрёстных реакций (системная красная волчанка, антифосфолипидный синдром, ревматоидный фактор, поликлональная активация при острых инфекциях, наркомания, пожилой возраст), при необходимости разрешения сложных диагностических ситуаций с противоречивыми результатами скрининговых и подтверждающих тестов, при обследовании беременных с положительным трепонемным скринингом и отрицательной нетрепонемной серологией. Положительный результат подтверждает специфичность IgG-реакции и истинно положительный результат скринингового теста; отрицательный или сомнительный результат при положительном скрининге указывает на возможный ложноположительный результат стандартного теста. Иммуноблоттинг для определения специфических IgG к Treponema pallidum использует разделённые электрофорезом или иммобилизованные на нитроцеллюлозной мембране отдельные рекомбинантные трепонемные белки, выступающие в роли иммунодоминантных антигенов: TpN15, TpN17, TpN44.5 (TmpA), TpN47 и ряд дополнительных белков.  

Возбудителем сифилиса является бактерия Treponema pallidum семейства Spirochaetaceae. Это спирохета — спиральной формы бактерия с подвижностью за счёт эндофлагелл, не культивируемая в стандартных бактериологических средах. Возбудитель чувствителен к высушиванию, нагреванию и большинству дезинфицирующих средств, во внешней среде быстро погибает. Естественным хозяином является только человек. Передача происходит преимущественно половым путём при незащищённых половых контактах с инфицированным партнёром в стадии первичного, вторичного или раннего скрытого сифилиса; реже — вертикально от матери к плоду через плаценту с развитием врождённого сифилиса, через препараты крови и компоненты крови от инфицированных доноров. 
Сифилис — системное инфекционное заболевание со стадийным течением и широким спектром клинических проявлений. Инкубационный период составляет 10–90 дней, в среднем 3 недели. Клинические формы заболевания включают первичный сифилис с твёрдым шанкром в месте внедрения возбудителя и регионарной лимфаденопатией, вторичный сифилис с генерализованными пятнисто-папулёзными высыпаниями, широкими кондиломами и поражением слизистых, скрытый сифилис без клинических проявлений, третичный сифилис с гуммозным поражением кожи, костей, внутренних органов, кардиоваскулярным сифилисом, нейросифилисом, а также врождённый сифилис при трансплацентарной передаче от матери к плоду. Нейросифилис может развиваться на любой стадии заболевания.

Антитела класса IgG к бледной трепонеме появляются в крови через 4–6 недель после инфицирования, нарастают в течение нескольких недель и сохраняются пожизненно у большинства пациентов вне зависимости от факта проведённого лечения. Это определяет их роль как маркеров перенесённого инфицирования: положительный IgG не разграничивает текущую активную инфекцию, ранее перенесённый и излеченный сифилис, давний скрытый сифилис.

Клиническое значение

При получении положительного результата стандартного трепонемного скрининга в обратном алгоритме серологической диагностики и отрицательного или сомнительного нетрепонемного теста (РМП) формируется дискордантная картина, требующая подтверждения трепонемным методом другого формата. Иммуноблоттинг IgG применяется в этой клинической ситуации как один из подтверждающих трепонемных методов наряду с РПГА (реакцией пассивной гемагглютинации) и другими альтернативными трепонемными тестами. Положительный результат иммуноблоттинга с реактивностью к нескольким иммунодоминантным антигенам подтверждает специфичность IgG-реакции и истинно положительный результат скрининга, что в сочетании с отрицательным нетрепонемным тестом соответствует ранее перенесённой и излеченной инфекции, давнему скрытому сифилису или скрытому сифилису у пациента, не получавшего лечения. Отрицательный или сомнительный результат иммуноблоттинга при положительном скрининге указывает на возможный ложноположительный результат стандартного теста, требует дополнительной оценки альтернативными трепонемными методами и интерпретации в комплексе с клинической картиной, эпидемиологическим анамнезом и данными о предшествующих результатах серологического обследования.

При подозрении на ложноположительный результат стандартного трепонемного скрининга у пациентов с факторами риска перекрёстных реакций (системная красная волчанка, антифосфолипидный синдром, ревматоидный артрит, наркомания, пожилой возраст, поликлональная активация при острых инфекциях) иммуноблоттинг применяется для разграничения истинно положительного результата и ложноположительной реакции в стандартном тесте. Стандартные иммуноферментные и иммунохемилюминесцентные тест-системы при высокой чувствительности имеют ограниченную специфичность за счёт перекрёстной реактивности с антителами при перечисленных состояниях. Иммуноблоттинг с раздельным выявлением антител к отдельным иммунодоминантным трепонемным белкам обеспечивает более высокую специфичность: положительный результат с реактивностью к нескольким ключевым антигенам подтверждает специфичность IgG-реакции, а реактивность только к одному антигену или к второстепенным белкам трактуется как сомнительный результат, требующий повторного обследования или альтернативного подтверждения.

У беременных с положительным трепонемным скринингом и отрицательным нетрепонемным тестом иммуноблоттинг IgG применяется как подтверждающий трепонемный тест перед решением вопроса о специфической терапии и оценкой риска врождённого сифилиса. Частота ложноположительных результатов трепонемных скрининговых тестов у беременных несколько выше, чем в общей популяции, за счёт физиологических изменений иммунной системы во время беременности. Положительный иммуноблоттинг IgG в этой ситуации подтверждает специфичность скринингового результата и направляет диагностический поиск к уточнению давности инфицирования; отрицательный или сомнительный результат иммуноблоттинга при отрицательном РМП снижает вероятность активной инфекции, однако не исключает диагноз и требует динамического наблюдения и комплексной оценки специалистом

У пациентов с длительно сохраняющейся положительной серологией после специфического лечения иммуноблоттинг IgG не применяется для разграничения активной инфекции (реинфекции или неудачи лечения) и серологического следа перенесённой инфекции, поскольку положительный результат в этой клинической ситуации не различает эти два состояния. Опорным методом оценки активности инфекции и эффективности лечения служит количественный нетрепонемный тест (РМП) с оценкой динамики титра: 4-кратное и более снижение титра в течение 6–12 месяцев после лечения соответствует успешному ответу на терапию, нарастание титра в 4 раза и более поддерживает диагноз реинфекции или неудачи лечения.

При подозрении на нейросифилис у пациентов с неврологической симптоматикой и подтверждённым системным сифилисом иммуноблоттинг IgG в крови применяется как подтверждающий трепонемный метод при противоречивых результатах стандартной серологии. Лабораторное подтверждение нейросифилиса опирается на нетрепонемный тест в спинномозговой жидкости, иммуноблоттинг IgG в крови подтверждает специфичность системной IgG-реакции, однако не служит самостоятельным маркером поражения нервной системы.

Ограничения

Положительный результат иммуноблоттинга IgG не разграничивает текущую активную инфекцию, ранее перенесённый и излеченный сифилис, давний скрытый сифилис; антитела IgG сохраняются пожизненно у большинства пациентов вне зависимости от факта проведённого лечения. Сомнительный результат иммуноблоттинга с реактивностью только к одному антигену или к второстепенным белкам не интерпретируется как положительный и требует повторного обследования через 2–4 недели или применения альтернативных подтверждающих методов. 
Ложноположительные результаты иммуноблоттинга IgG встречаются реже, чем в стандартном иммуноферментном анализе, однако возможны при системных аутоиммунных заболеваниях (системная красная волчанка, антифосфолипидный синдром, ревматоидный артрит), у пациентов с ревматоидным фактором, при инфекциях, вызываемых другими спирохетами (фрамбезия, беджель, пинта, бактериями рода Borrelia). Перекрёстные реакции с боррелиозом особенно значимы в эндемичных по клещевому боррелиозу регионах и требуют учёта эпидемиологического анамнеза. 
У пациентов с иммунодефицитом, в том числе при ВИЧ-инфекции в стадии глубокой иммуносупрессии, выработка IgG может быть ослабленной, отсроченной или иметь атипичную динамику; результаты серологии, в том числе иммуноблоттинга, могут не отражать реальной активности инфекции и интерпретируются в комплексе с клинической картиной, данными нетрепонемных тестов и при необходимости с прямым выявлением возбудителя. 
Окончательный диагноз и решение о тактике ведения принимаются дерматовенерологом или другим профильным специалистом на основании совокупности клинических, лабораторных и эпидемиологических данных, результатов комплексного серологического обследования трепонемными и нетрепонемными методами и при необходимости — обследования контактных лиц.