Антитела IgА к хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) методом иммуноблоттинга в крови

Исследование выявляет антитела класса IgA к отдельным антигенным белкам Helicobacter pylori в крови и формирует развернутый серологический профиль иммунного ответа на бактерию. Helicobacter pylori колонизирует слизистую оболочку желудка и способна длительно сохраняться в ней, поддерживая хроническое активное воспаление, на фоне которого формируются антитела к различным структурным и функциональным компонентам микроорганизма. В иммунный ответ вовлекаются белки наружной мембраны, элементы жгутикового аппарата, субъединицы уреазы, цитотоксин-ассоциированные белки и другие антигенные структуры, поэтому реакция организма на H. pylori представляет собой многокомпонентный процесс, выраженность и состав которого различаются у разных пациентов. Антитела IgA участвуют в защите слизистых оболочек и отражают один из компонентов гуморального иммунного ответа на H. pylori. При инфекции антитела этого класса образуются в ответ на контакт иммунной системы с бактериальными антигенами и могут определяться в сыворотке крови, хотя выраженность системного IgA-ответа зависит от индивидуальных особенностей иммунной реакции и не одинакова у всех инфицированных пациентов. Серологическое обнаружение IgA поэтому свидетельствует о сформированном иммунном ответе на H. pylori, тогда как присутствие антител само по себе не определяет, сохраняется ли бактерия в желудке в момент исследования. 
Иммуноблоттинг позволяет раздельно оценивать IgA-антитела к нескольким антигенам H. pylori, существенно различающимся по диагностической специфичности и биологической роли. В исследовании одновременно анализируются антитела к высокоспецифичным и видоспецифичным белкам, а также к антигенам, способным вступать в перекрестные реакции с белками других бактерий, поэтому заключение формируется по совокупности выявленных полос и их диагностической значимости. Такой подход дает возможность оценить структуру антительного ответа значительно подробнее, чем серологическое исследование, в котором реакция определяется к суммарному антигенному комплексу H. pylori. В представленном исследовании оцениваются антитела к 15 антигенным белкам, включая CagA, VacA, субъединицы уреазы A и B, белки наружной мембраны и элементы жгутикового аппарата. 
Среди антигенов наибольший биологический интерес представляют CagA и VacA, связанные с патогенными свойствами H. pylori. CagA участвует во взаимодействии бактерии с желудочным эпителием и способен усиливать воспалительные и внутриклеточные сигнальные процессы, тогда как VacA представляет собой вакуолизирующий цитотоксин, воздействующий на эпителиальные и иммунные клетки слизистой оболочки. Антитела к этим белкам подтверждают формирование иммунного ответа на соответствующие антигенные компоненты бактерии, однако их серологическое обнаружение не эквивалентно прямому исследованию генетических особенностей находящегося в желудке штамма и не используется как самостоятельный показатель тяжести гастрита или индивидуального риска опухолевого заболевания.

Состав исследования

• p19 , видоспецифичный белок наружной мембраны Helicobacter pylori.
• p41 , неспецифический антиген.
• p50 , неспецифический антиген.
• Флагеллин p54 , белок жгутикового аппарата, для которого возможна перекрестная реактивность с другими жгутиковыми бактериями.
• FSH p67 , белок оболочки жгутика, способный вступать в перекрестные реакции с антигенами других бактерий.
• p75 , неспецифический антиген.
• p17 , предположительно специфический антиген.
• CagA p120 , высокоспецифичный цитотоксин-ассоциированный белок.
• VacA p95 , высокоспецифичный вакуолизирующий цитотоксин.
• Уреаза B p66 , тяжелая субъединица уреазы, для которой возможна перекрестная реактивность с другими уреазопродуцирующими бактериями.
• Белок теплового шока p57 , неспецифический антиген.
• p33 , предположительно специфический антиген.
• p30 , видоспецифичный белок наружной мембраны.
• Уреаза A p29 , высокоспецифичная легкая субъединица уреазы.
• p26 , высокоспецифичный антиген.

Клиническое значение

IgA-иммуноблот используется как расширенное серологическое исследование при оценке иммунного ответа на H. pylori у пациентов с заболеваниями, связанными с хеликобактерной инфекцией, включая хронический гастрит, язвенную болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, атрофический гастрит и другие состояния, при которых требуется уточнение серологической реактивности к бактериальным антигенам. Выявление специфического сочетания IgA-антител подтверждает, что иммунная система распознавала антигены H. pylori, а раздельная оценка отдельных белковых мишеней позволяет определить, какие компоненты бактерии участвуют в сформированном антительном ответе. Особенно важна совокупная интерпретация профиля, поскольку реакция на высокоспецифичные антигены имеет большее диагностическое значение, чем изолированное выявление антител к белкам, способным давать перекрестную реактивность. 
Серологическая оценка может дополнять обследование в клинических ситуациях, при которых количество H. pylori в желудке уменьшается и чувствительность методов, непосредственно связанных с присутствием бактерии, способна снижаться, например при выраженной атрофии слизистой, желудочно-кишечном кровотечении или недавнем воздействии препаратов, подавляющих H. pylori. В подобных обстоятельствах антительный ответ способен сохраняться даже при низкой бактериальной нагрузке, поэтому серологические исследования иногда дают дополнительную информацию о предшествующем или продолжающемся контакте организма с H. pylori. Для IgA-иммуноблота эта роль остается дополнительной, поскольку современные диагностические подходы к H. pylori в большей степени опираются на валидированные IgG-серологические исследования и методы, непосредственно связанные с текущей инфекцией.
Антительный профиль к CagA, VacA, уреазе и другим белкам позволяет углубить характеристику иммунного ответа, поскольку отдельные антигены связаны с различными механизмами колонизации и повреждения слизистой оболочки желудка. Выявление антител к высокоспецифичным белкам повышает убедительность серологической связи с H. pylori, тогда как реактивность к менее специфичным антигенам оценивается только в составе общего профиля. Наличие антител к CagA или VacA может указывать на иммунный контакт с соответствующими факторами патогенности бактерии, однако клиническая интерпретация такого результата требует осторожности, поскольку серологический профиль не определяет активность гастрита, степень атрофии слизистой или индивидуальный риск язвенной болезни и рака желудка.

Важное значение при интерпретации IgA-иммуноблота имеет различие между сформированным иммунным ответом и фактическим присутствием H. pylori в желудке. Антитела могут сохраняться после эрадикационной терапии и определяться уже после исчезновения бактерии, тогда как у части пациентов с текущей инфекцией выраженный сывороточный IgA-ответ отсутствует. Поэтому положительный результат подтверждает наличие специфической иммунной реакции на H. pylori, но для установления текущей инфекции предпочтение отдается исследованиям, непосредственно связанным с присутствием бактерии, включая антиген H. pylori в кале, уреазный дыхательный тест и исследования биопсийного материала.
Та же особенность определяет место исследования после проведенного лечения, поскольку концентрация антител снижается значительно медленнее, чем исчезает сама бактерия. Сохраняющийся положительный IgA-иммуноблот после эрадикационной терапии может отражать остаточный гуморальный иммунный ответ и поэтому не используется для подтверждения успешности лечения. Контроль эрадикации проводят методами, результат которых меняется вместе с присутствием H. pylori, прежде всего исследованием антигена в кале или уреазным дыхательным тестом, что позволяет отделить сохраняющийся иммунологический след инфекции от продолжающейся бактериальной колонизации.

Что влияет на результат

Формирование антител IgA зависит от функционального состояния иммунной системы, поэтому селективный дефицит IgA, выраженная гипогаммаглобулинемия и другие состояния с существенным нарушением антителообразования способны приводить к слабой или отсутствующей серологической реакции даже при предшествующем контакте с H. pylori. Для иммуноблота эта особенность имеет непосредственное значение, поскольку результат определяется интенсивностью специфического антительного ответа пациента. Специфические антитела формируются постепенно, поэтому на раннем этапе инфекции их концентрация может оставаться ниже уровня, необходимого для получения выраженного серологического профиля. По мере развития иммунного ответа реактивность к отдельным антигенам изменяется, вследствие чего результаты, полученные на разных этапах инфекции, могут различаться. После устранения H. pylori сформированные антитела способны сохраняться в кровотоке продолжительное время, поэтому положительный результат после лечения может отражать иммунологическую память о предшествующей инфекции. Такая динамика антительного ответа является физиологической особенностью серологического исследования и объясняет, почему IgA-иммуноблот не используется для лабораторного подтверждения эрадикации.