Антитела IgG к двуспиральной ДНК (дсДНК): подтверждающий тест на Crithidia luciliae

Антитела IgG к двуспиральной ДНК (anti-dsDNA) представляют собой аутоантитела, направленные против собственной ДНК клеток. Двуспиральная ДНК является основной формой хранения наследственной информации, при естественной гибели клеток фрагменты ДНК высвобождаются и в норме быстро удаляются, не вызывая продолжительного иммунного ответа. Нарушение удаления клеточного материала и иммунологической толерантности может привести к тому, что иммунная система начинает воспринимать собственную ДНК как мишень и вырабатывать anti-dsDNA. Anti-dsDNA входят в группу антинуклеарных антител и относятся к наиболее значимым лабораторным маркерам системной красной волчанки. Связываясь с ядерным материалом, антитела участвуют в образовании иммунных комплексов. Эти комплексы могут откладываться в тканях и активировать систему комплемента, поддерживая воспалительный процесс. Наибольшее клиническое значение этот механизм имеет при поражении почечных клубочков. 
Для подтверждения наличия anti-dsDNA в данном исследовании используют клетки Crithidia luciliae. Это одноклеточный жгутиковый микроорганизм, внутри клеток которого находится кинетопласт,  являющийся компактным участком внутри митохондрии, где сосредоточено большое количество кольцевых молекул двуспиральной ДНК. Эта ДНК не связана с гистонами, то есть белками, с которыми обычно соединена ДНК в клеточном ядре. Кинетопласт также не содержит большинства других ядерных антигенов, способных вступать в реакцию с антинуклеарными антителами. Антитела IgG из сыворотки пациента связываются с ДНК кинетопласта, что выявляется по его свечению и подтверждает наличие anti-dsDNA. 
Обычное количественное исследование anti-dsDNA выявляет более широкий спектр антител и обладает большей чувствительностью. Это означает, что оно чаще обнаруживает anti-dsDNA при их наличии, в том числе в невысокой концентрации. Однако некоторые выявляемые им антитела могут иметь меньшую специфичность для системной красной волчанки. Исследование на Crithidia luciliae обладает более высокой специфичностью и выявляет антитела, которые прочно связываются с нативной двуспиральной ДНК. Поэтому тест применяют для уточнения положительного или сомнительного результата обычного исследования на anti-dsDNA. Эти анализы не дублируют друг друга: обычное исследование помогает обнаружить более широкий спектр антител, а тест на Crithidia luciliae подтверждает их направленность против дсДНК.

Клиническое значение

Системная красная волчанка представляет собой хроническое аутоиммунное заболевание, при котором воспалительный процесс поражает различные органы и ткани. В структуре классификационных критериев EULAR/ACR 2019 выявление anti-dsDNA оценивается в 6 баллов, что соответствует максимальному значению среди иммунологических признаков СКВ. Для включения этого показателя в критерии используемое исследование должно иметь специфичность не менее 90%. Anti-dsDNA участвуют в образовании иммунных комплексов, которые откладываются в тканях и активируют систему комплемента. Наибольшее клиническое значение этот механизм имеет при волчаночном нефрите, то есть иммунном воспалении почечных клубочков. Поражение почек развивается у 20–60% пациентов с СКВ в зависимости от возраста и популяции и может сопровождаться появлением белка и эритроцитов в моче, отёками, повышением артериального давления и снижением функции почек.

Высокий или нарастающий уровень anti-dsDNA в сочетании со снижением компонентов комплемента и изменениями в анализе мочи отражает повышение иммунологической активности СКВ и имеет важное значение при оценке волчаночного нефрита. Состояние почек оценивают по совокупности anti-dsDNA, компонентов комплемента, протеинурии, мочевого осадка и скорости клубочковой фильтрации.

Для количественного наблюдения за уровнем антител и его изменением в динамике используют количественное определение anti-dsDNA. Совместное применение этих исследований позволяет подтвердить направленность антител и оценить активность аутоиммунного процесса.

Что влияет на результат анализа

На выявление anti-dsDNA влияет фаза заболевания. При ранней стадии СКВ или снижении иммунологической активности количество антител, связывающихся с ДНК кинетопласта, может быть ниже уровня обнаружения подтверждающего теста. Лечение, подавляющее активность иммунной системы, снижает образование anti-dsDNA. Результат, полученный после начала терапии, отражает текущий уровень антител и может отличаться от исходного. При оценке результата учитывают срок начала лечения и изменения лечебной схемы. Плазмообмен и другие процедуры, удаляющие иммуноглобулины из кровотока, временно снижают уровень anti-dsDNA. При интерпретации результата учитывают срок между проведением процедуры и взятием крови.