Андрофлор: пцр исследование микрофлоры урогенитального тракта мужчин

Исследование комплексно оценивает микробный состав мочеполового тракта мужчины. Расширенная панель из 24 показателей охватывает нормальную флору, широкий спектр условно-патогенных микроорганизмов (включая труднокультивируемые анаэробы), дрожжевые грибы и облигатные патогены ИППП. 
Методом ПЦР в режиме реального времени в биоматериале из урогенитального тракта одновременно выполняется количественная оценка микробиоценоза по 24 показателям. Исследование может быть выполнено из различных биоматериалов, и выбор биоматериала — принципиально важный момент, определяющий диагностическую ценность результата. Соскоб из уретры отражает микрофлору нижних отделов мочевыводящих путей и оптимален для диагностики уретрита и баланопостита. Секрет предстательной железы непосредственно характеризует микробиоценоз простаты и является предпочтительным материалом при подозрении на простатит (при отсутствии противопоказаний к массажу простаты). Эякулят содержит секрет предстательной железы, семенных пузырьков и проходит через уретру, отражая совокупную микрофлору нескольких отделов; этот биоматериал оптимален при обследовании по поводу мужского бесплодия. Моча после массажа простаты используется как альтернатива секрету простаты, когда получение секрета затруднено. Первая порция утренней мочи (без массажа) пригодна только для качественной идентификации патогенов, но не для полноценной оценки биоценоза. Результат исследования всегда интерпретируется с учётом того, из какого биоматериала он получен — экстраполировать данные уретрального соскоба на предстательную железу некорректно, и наоборот.

Панель организована в функциональные группы. Контрольный показатель — геномная ДНК человека — подтверждает адекватность забора и достаточное количество клеточного материала. Общая бактериальная масса (ОБМ) отражает суммарное количество бактерий и служит знаменателем для расчёта долей всех групп. Транзиторная микрофлора (Lactobacillus spp.) оценивается отдельно: лактобациллы не являются облигатным компонентом мужского микробиоценоза и в норме могут отсутствовать — в отличие от женского урогенитального тракта, где лактобациллы доминируют. Нормофлора (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium spp.) — представители нормального микробного сообщества уретры мужчины, которые в здоровом биоценозе составляют преобладающую долю.

Условно-патогенные микроорганизмы представлены несколькими подгруппами, и именно в их расширенном охвате заключается принципиальное отличие полного Андрофлора от скрининговой версии. Первая подгруппа — УПМ, ассоциированные с бактериальным вагинозом (Gardnerella vaginalis, Megasphaera/Veillonella/Dialister spp., Sneathia/Leptotrichia/Fusobacterium spp., Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Mycoplasma hominis, Atopobium cluster). Несмотря на название, связанное с женской патологией, роль этих микроорганизмов в развитии урогенитальных заболеваний у мужчин также документирована. Вторая подгруппа — УПМ-анаэробы (Bacteroides/Porphyromonas/Prevotella spp., Anaerococcus spp., Peptostreptococcus/Parvimonas spp., Eubacterium spp.) — облигатные анаэробные бактерии, которые не выявляются стандартным аэробным бактериологическим посевом и требуют специальных условий культивирования, в рутинной лабораторной практике, как правило, недоступных. Именно эта подгруппа делает расширенный Андрофлор уникальным диагностическим инструментом: анаэробы формируют значительную часть микробиоценоза предстательной железы и играют существенную роль в развитии хронических воспалительных процессов, оставаясь «невидимыми» для стандартных методов исследования. Третья подгруппа — микроорганизмы, ассоциированные с негонококковыми уретритами (Haemophilus spp., Pseudomonas aeruginosa/Ralstonia spp./Burkholderia spp.) и энтеробактерии/энтерококки (Enterobacteriaceae/Enterococcus spp.). Дрожжевые грибы (Candida spp.) определяются количественно. Облигатные патогены (Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis) определяются качественно: «обнаружено» или «не обнаружено».

Результаты представляются в нескольких форматах одновременно: абсолютные значения в геном-эквивалентах (lg), относительные значения как разница с ОБМ (lg(X/ОБМ)) и процентная доля от ОБМ. Для микоплазм, уреаплазм и Candida выдаются только абсолютные значения. Тест-система автоматически формирует заключение о состоянии микробиоценоза на основании соотношений различных групп микроорганизмов с ОБМ и между собой с использованием цветовой маркировки степени отклонения от нормы.

Клиническое значение

Андрофлор предназначен для этиологической диагностики хронических и рецидивирующих инфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовой системы мужчин, для обследования при нарушении репродуктивной функции и для контроля эффективности терапии.

Центральная область применения — хронический простатит. Согласно классификации NIH, бактериальный простатит подразделяется на острый (категория I), хронический бактериальный (категория II) и хронический абактериальный с воспалительным компонентом (категория IIIA). При категории II и особенно IIIA стандартный бактериологический посев секрета простаты нередко оказывается отрицательным, что исторически приводило к диагнозу «абактериальный простатит». Исследования с применением молекулярных методов показали, что значительная часть таких случаев ассоциирована с полимикробными анаэробными сообществами, которые формируют биоплёнки на слизистых оболочках и не выявляются при аэробном культивировании. Bacteroides, Prevotella и Porphyromonas обнаруживаются в секрете простаты при хроническом простатите существенно чаще, чем у здоровых мужчин. Eubacterium spp. ассоциирован с формированием устойчивых биоплёнок, затрудняющих эрадикацию возбудителей. Peptostreptococcus и Anaerococcus могут участвовать в полимикробных ассоциациях, поддерживающих хроническое воспаление. Выявление этих микроорганизмов и оценка их количественного вклада в микробное сообщество позволяют врачу обосновать этиологический диагноз и целенаправленно подобрать терапию. При отсутствии клинических проявлений простатита обнаружение анаэробов не является самостоятельным показанием к лечению.

При рецидивирующих уретритах, когда облигатные патогены (хламидии, гонококк, M. genitalium, трихомонады) исключены, а симптомы сохраняются или возобновляются, расширенная панель позволяет выявить менее типичных возбудителей. Haemophilus spp. признан ассоциированным с негонококковыми уретритами; Pseudomonas aeruginosa и Burkholderia spp. могут выступать в качестве этиологического фактора при рецидивирующих инфекциях, особенно у пациентов после инструментальных вмешательств на мочевыводящих путях. Одновременная оценка анаэробного компонента позволяет выявить дисбиотические нарушения, которые могут поддерживать воспалительный процесс. Обнаружение преобладания условно-патогенной флоры над нормофлорой на фоне клинической симптоматики помогает врачу определить направление терапии.

При мужском бесплодии оценка микробиоценоза эякулята или секрета простаты входит в комплекс обследования, особенно при наличии лейкоспермии (повышенного содержания лейкоцитов в сперме). Хроническая инфекция мочеполового тракта может влиять на параметры спермограммы через несколько механизмов: прямое повреждение сперматозоидов микроорганизмами, воспалительный оксидативный стресс с повышением уровня активных форм кислорода, повреждающих мембраны и ДНК сперматозоидов, а также нарушение состава семенной плазмы. Расширенная панель позволяет выявить скрытый инфекционный фактор, не обнаруживаемый стандартным посевом, что особенно актуально перед проведением процедур вспомогательных репродуктивных технологий (ЭКО/ИКСИ). Однако необходимо учитывать, что связь между конкретными условно-патогенными микроорганизмами и нарушением фертильности не для всех возбудителей окончательно установлена, и результат интерпретируется врачом-репродуктологом в совокупности с другими данными обследования.

Обнаружение облигатных патогенов (C. trachomatis, N. gonorrhoeae, T. vaginalis, M. genitalium) имеет однозначное клиническое значение и требует лечения, обследования половых партнёров, а для хламидиоза и гонореи — уведомления эпидемиологической службы. Обнаружение условно-патогенных микроорганизмов (включая анаэробы, Gardnerella, Ureaplasma, M. hominis, Candida) при отсутствии симптомов воспаления, как правило, отражает носительство и не является показанием к лечению. Назначение антибактериальной терапии исключительно на основании количественного результата без клинических проявлений сопряжено с риском формирования антибиотикорезистентности и не является обоснованной тактикой.

Исследование применяется для мониторинга эффективности терапии. Повторный тест после лечения позволяет оценить элиминацию возбудителей, динамику анаэробного компонента и восстановление нормофлоры. Повторное исследование рекомендуется не ранее чем через 14 дней после завершения местной и не ранее чем через 1 месяц после завершения системной антибактериальной терапии. Сравнение результатов до и после лечения наиболее информативно при использовании того же биоматериала и той же тест-системы.

Андрофлор наиболее информативен при хроническом простатите с неустановленной или предположительно полимикробной этиологией, при рецидивирующих уретритах после исключения облигатных патогенов, при обследовании по поводу мужского бесплодия (особенно при лейкоспермии), при подготовке к ВРТ и при контроле эффективности лечения хронических инфекционно-воспалительных заболеваний. Для диагностики острых процессов (острый уретрит, острый баланопостит) достаточной может быть скрининговая версия (Андрофлор Скрин). Выбор между расширенной и скрининговой версией определяется лечащим врачом в зависимости от клинической ситуации. Рутинное использование теста у бессимптомных мужчин без клинических показаний может приводить к обнаружению условно-патогенных микроорганизмов, клиническое значение которых при отсутствии симптомов ограничено.

Ограничения

Автоматическое заключение тест-системы о состоянии микробиоценоза формируется на основании расчётных алгоритмов и носит ориентировочный характер. Заключение не является клиническим диагнозом и не заменяет врачебной оценки. Концепция дисбиоза мужского урогенитального тракта менее изучена и менее валидирована, чем дисбиоз влагалища у женщин, и причинно-следственные связи между количественными изменениями микрофлоры и клиническими проявлениями продолжают исследоваться. 
Обнаружение условно-патогенных микроорганизмов (включая анаэробы) в любом количестве при отсутствии симптомов, как правило, не является показанием к лечению. Обнаружение облигатных патогенов требует лечения независимо от наличия симптомов. 
Результат характеризует микрофлору только той анатомической локализации, из которой выполнен забор. Соскоб из уретры не отражает состояние предстательной железы, придатков яичек или семенных пузырьков. Для диагностики простатита необходим секрет простаты, эякулят или моча после массажа простаты. При подозрении на острый простатит массаж простаты категорически противопоказан. 
Исследование не определяет вирусные возбудители (ВПГ, ЦМВ, ВПЧ); при необходимости вирусологической диагностики выполняются отдельные ПЦР-тесты из того же биоматериала. Тест не предоставляет данных об антибиотикочувствительности. При необходимости определения резистентности рекомендуется бактериологическое исследование, хотя для облигатных анаэробов стандартный аэробный посев неинформативен, а анаэробный посев доступен не во всех лабораториях. 
Качество преаналитического этапа критически влияет на достоверность результата. Приём антибактериальных препаратов, местное применение антисептиков, мочеиспускание менее чем за 2–3 часа до забора соскоба из уретры, половой контакт накануне исследования могут искажать результат. При неудовлетворительном контроле взятия материала (недостаточное количество геномной ДНК человека) результат признаётся неинформативным и рекомендуется повторный забор.