Анализ специфических аберраций MYC, BCL2, BCL6 и TP53 на парафиновых срезах (гистоFISH, колич.)

Исследование выявляет хромосомные нарушения в локусах MYC, BCL2, BCL6 и TP53 непосредственно в опухолевой ткани, заключённой в парафиновый блок. Эти гены связаны с контролем пролиферации, созревания и выживания лимфоидных клеток, а их перестройки или делеции встречаются при различных B-клеточных лимфомах. Определение таких изменений дополняет морфологическое и иммуногистохимическое исследование опухоли, поскольку лимфомы со сходным строением и фенотипом могут различаться по генетическим нарушениям, биологическому поведению и прогнозу. Особенно важны перестройки MYC, BCL2 и BCL6 при агрессивных B-клеточных лимфомах. MYC стимулирует клеточный рост и пролиферацию, BCL2 поддерживает выживание клеток за счёт подавления апоптоза, а BCL6 участвует в программе созревания B-лимфоцитов герминативного центра. Делеция TP53/17p13 затрагивает один из ключевых механизмов контроля повреждений ДНК и может отражать дополнительную генетическую эволюцию опухолевого клона.  
Количественный результат показывает долю исследованных опухолевых ядер, в которых обнаружена конкретная аберрация, поэтому MYC, BCL2, BCL6 и TP53 оцениваются независимо друг от друга. Это позволяет определить, какие генетические изменения сосуществуют в исследуемой опухоли и насколько широко соответствующий цитогенетический клон представлен в выбранном участке ткани. Сигнальный паттерн отдельных FISH-проб может также показать изменение числа копий локуса; например, для BCL2 лабораторный результат предусматривает отдельную регистрацию дополнительной копии даже при отсутствии перестройки.

Состав исследования

• MYC/8q24 — перестройка локуса MYC;
• BCL2/18q21.3 — перестройка локуса BCL2; при анализе также может выявляться изменение числа копий локуса;
• BCL6/3q27 — перестройка локуса BCL6;
• TP53/17p13 — делеция локуса TP53.

Клиническое значение

При диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфоме и других агрессивных крупноклеточных B-клеточных лимфомах исследование перестроек MYC, BCL2 и BCL6 помогает уточнить генетический вариант опухоли. Особенно значимо одновременное выявление перестроек MYC и BCL2 , поскольку в современной классификации такие опухоли выделяются в отдельную генетически определённую группу; дополнительная перестройка BCL6 также может присутствовать в этом клоне. Сочетание MYC и BCL6 без перестройки BCL2 имеет другое классификационное значение и оценивается с учётом морфологии и остальных признаков лимфомы. Поэтому одновременное исследование трёх локусов позволяет отличить изолированную перестройку одного гена от сочетания нескольких драйверных изменений и точнее определить место опухоли в современной классификации B-клеточных лимфом. 
Перестройки этих генов могут встречаться и при других лимфомах. BCL2 характерно вовлекается в перестройки при фолликулярной лимфоме, MYC имеет центральное значение при лимфоме Беркитта и может появляться как дополнительное нарушение при других агрессивных B-клеточных опухолях, а BCL6 перестраивается при части диффузных крупноклеточных B-клеточных лимфом и некоторых других зрелых B-клеточных неоплазиях. Поэтому обнаруженная аберрация интерпретируется вместе с гистологическим строением опухоли и иммуногистохимическим фенотипом: один и тот же изменённый локус приобретает диагностический смысл в контексте конкретного типа лимфомы. ГистоFISH особенно полезен именно в этой ситуации, поскольку исследование выполняется на биопсийном или операционном материале из опухолевого очага , даже когда патологические клетки отсутствуют в периферической крови или костном мозге. 
Делеция TP53/17p13 показывает наличие опухолевого клона с потерей участка хромосомы, содержащего ген TP53. Такое изменение нарушает один из механизмов, ограничивающих выживание клеток с повреждённой ДНК, и при ряде лимфоидных неоплазий может сопровождать клональную эволюцию и более сложный генетический профиль опухоли. Данный FISH-анализ выявляет именно хромосомную потерю локуса TP53 ; изменения последовательности сохранённой копии гена этим методом не определяются. При необходимости полного исследования TP53 результат дополняют молекулярно-генетическим анализом мутаций.  
Отрицательный результат по одному из локусов означает отсутствие соответствующей FISH-выявляемой перестройки или делеции в исследованных клетках . Панель исследует конкретные аберрации MYC, BCL2, BCL6 и TP53, поэтому при другой предполагаемой лимфоме или необходимости более широкой генетической характеристики опухоли могут потребоваться дополнительные FISH-мишени или молекулярно-генетические исследования.

Что влияет на результат

Информативность исследования зависит от количества и сохранности опухолевых клеток в парафиновом материале, доли опухоли в исследуемом участке и качества ядер. Выраженный некроз, небольшое количество опухолевой ткани или малое число пригодных для оценки клеток могут ограничивать возможность количественного анализа и снижать вероятность обнаружения малочисленного патологического клона. На качество FISH-сигналов влияет предшествующая обработка ткани. Нарушение условий фиксации, выраженное повреждение материала и декальцинация могут ухудшать сохранность ДНК и качество гибридизации. Для исследования требуется парафиновый блок или подготовленные срезы с достаточным количеством сохранной опухолевой ткани; выбор участка с репрезентативным опухолевым компонентом особенно важен при неоднородном биопсийном материале.