Анализ транслокации t(4;14)(p16;q32) методом FISH

Это молекулярно-цитогенетическое исследование выявляет в клетках костного мозга особую хромосомную перестройку — транслокацию t(4;14), при которой участки четвёртой и четырнадцатой хромосом меняются местами. Её обнаруживают при множественной миеломе, опухоли из плазматических клеток костного мозга. В отличие от перестроек, образующих слитный ген с аномальным белком, при t(4;14) участок четвёртой хромосомы с генами FGFR3 и MMSET попадает под управление мощного регуляторного элемента, который в норме включает выработку антител. В результате эти гены начинают работать с чрезмерной активностью, что и подталкивает плазматические клетки к злокачественному росту. Анализ выполняется методом FISH (флуоресцентная гибридизация in situ): к участкам вовлечённых хромосом присоединяют светящиеся метки, и под микроскопом в ядрах клеток видно, произошло ли их сближение, характерное для транслокации. Результат количественный: подсчитывают долю клеток с перестройкой среди исследованных. При множественной миеломе FISH особенно важен, потому что обычное цитогенетическое исследование часто оказывается недостаточно чувствительным для выявления t(4;14): опухолевые плазматические клетки плохо делятся в культуре и дают мало материала для такого анализа. Поэтому для оценки этой перестройки предпочтительно исследование плазматических клеток костного мозга, по возможности после их предварительного выделения или с применением методик, повышающих точность анализа. 
Анализ применяют при установленном или предполагаемом диагнозе множественной миеломы для уточнения генетических особенностей опухоли. Эти особенности входят в число факторов, по которым оценивают ожидаемое течение болезни и распределяют пациентов по группам риска. Результат оценивает врач-гематолог в комплексе с другими цитогенетическими находками и клиническими данными.

Клиническое значение

Обнаружение транслокации t(4;14) подтверждает, что опухоль относится к определённой генетической подгруппе множественной миеломы. Эта перестройка относится к первичным транслокациям локуса иммуноглобулинов, то есть к событиям, которые возникают на раннем этапе опухолевого превращения плазматических клеток и определяют основную биологию опухоли, поэтому она присутствует с начала болезни и сохраняется на всём её протяжении. Механизм её влияния отличается от перестроек, образующих слитный белок. В норме на четырнадцатой хромосоме расположен участок, управляющий выработкой антител в плазматических клетках, и он обладает очень высокой активностью. При транслокации рядом с ним оказываются гены с четвёртой хромосомы, и под действием этого активного элемента они начинают работать значительно сильнее обычного. Ген MMSET (его также обозначают NSD2), управляющий упаковкой ДНК и через неё общей регуляцией работы генома опухолевой клетки, усиленно работает при этой перестройке практически всегда, а ген FGFR3, кодирующий рецептор фактора роста и усиливающий сигналы к делению, активируется в части случаев. В основе злокачественного роста лежит именно эта избыточная активность, поэтому обнаружение перестройки указывает на конкретный механизм, определяющий данный вариант опухоли.

Главное практическое значение анализа — оценка прогноза и распределение пациентов по группам риска. Транслокация t(4;14) относится к неблагоприятным генетическим признакам множественной миеломы: при ней болезнь склонна к более агрессивному течению и раннему возврату. Поэтому её обнаружение относит случай к группе повышенного риска и влияет на выбор интенсивности и состава лечения. Современные схемы с применением отдельных классов противоопухолевых препаратов, в частности ингибиторов протеасомы, способны частично улучшить течение болезни при этой перестройке, поэтому её выявление важно для своевременного выбора подходящей терапии.

Прогностический вес транслокации возрастает при сочетании с другими неблагоприятными нарушениями. Когда t(4;14) выявляется вместе с потерей участка семнадцатой хромосомы или приростом материала первой, риск тяжёлого течения существенно выше, чем при изолированной перестройке. Именно поэтому результат оценивают не как единичный признак, а в составе всего цитогенетического профиля опухоли, и обнаружение сразу нескольких маркёров высокого риска усиливает основания для более интенсивного лечения.

Отрицательный результат означает, что транслокация t(4;14) в исследованных плазматических клетках не выявлена. Это исключает один из значимых маркёров высокого риска, но сам по себе не определяет прогноз: оценку риска проводят по всей цитогенетической панели, включая потерю участка семнадцатой хромосомы, изменения первой хромосомы и другие транслокации локуса иммуноглобулинов, а также по стадии болезни и клиническим показателям. Среди генетических вариантов миеломы выделяют отдельные группы со стандартным риском, в том числе опухоли с увеличенным числом хромосом и с транслокацией t(11;14), однако и их оценивают в общем контексте, а не как однозначно благоприятные. Достоверность отрицательного результата зависит от доли опухолевых клеток в образце, поэтому его сопоставляют с содержанием плазматических клеток в костном мозге, а при их малом количестве исследование предпочтительно выполнять на выделенной опухолевой популяции.

Количественный формат исследования дополняет качественную оценку. Метод определяет не только сам факт перестройки, но и долю опухолевых клеток, несущих её, среди исследованных. Это отражает, какая часть плазматических клеток костного мозга относится к данному генетическому варианту, и учитывается при общей оценке опухоли. Результат рассматривают вместе с другими генетическими нарушениями, поскольку прогноз при миеломе определяется их совокупностью, а не одним признаком.

Результат важен не только при первичной диагностике, но и для понимания того, как болезнь меняется со временем. Будучи первичным событием, транслокация t(4;14) сохраняется на всём протяжении заболевания, тогда как при возврате болезни к ней могут присоединяться вторичные нарушения, усиливающие агрессивность опухоли. Поэтому сопоставление цитогенетического профиля в начале болезни и при её прогрессировании помогает понять механизм возврата и оценить, появились ли новые маркёры высокого риска. Сохранение исходно выявленной перестройки подтверждает её роль в биологии конкретной опухоли и поддерживает выбор более интенсивной тактики при возврате болезни.

Что влияет на результат анализа

Достоверность результата зависит прежде всего от качества исследуемого образца. Опухолевые плазматические клетки распределены в костном мозге неравномерно и могут составлять лишь часть его клеток, поэтому для надёжного выявления перестройки важны правильный забор материала и достаточное содержание в нём опухолевых клеток. В ряде случаев для повышения точности плазматические клетки предварительно выделяют из образца, что определяется методикой лаборатории. На возможность исследования влияют также своевременная доставка и условия хранения материала. Существуют вариантные точки разрыва в пределах вовлечённого участка хромосомы, что учитывают при выборе диагностической пробы. Все результаты сопоставляют с клинической картиной, данными исследования костного мозга и другими генетическими тестами, поскольку прогностическая оценка при множественной миеломе строится на совокупности признаков.