Анализ транслокации t(2;5)(p23;q35) методом FISH

Транслокация t(2;5)(p23;q35) представляет собой обмен участками между хромосомами 2 и 5, в результате которого ген киназы ALK (короткое плечо хромосомы 2) сливается с геном нуклеофозмина NPM1 (длинное плечо хромосомы 5). В зрелых лимфоцитах ген ALK в норме неактивен. После слияния он попадает под контроль постоянно работающего промотора NPM1, и клетка начинает непрерывно синтезировать химерный белок NPM1-ALK с постоянно включенной тирозинкиназной активностью. Такая киназа запускает внутриклеточные сигнальные каскады, стимулирующие деление и подавляющие гибель клетки, что приводит к злокачественной трансформации Т-лимфоцитов. Метод FISH (флуоресцентная гибридизация in situ) выявляет саму хромосомную перестройку непосредственно в ядрах опухолевых клеток, поэтому исследование выполняется на ткани опухоли, как правило на биопсийном материале пораженного лимфатического узла или внеузлового очага.

Транслокация t(2;5) характерна для анапластической крупноклеточной лимфомы (АККЛ), агрессивной Т-клеточной лимфомы, которая чаще встречается у детей, подростков и молодых взрослых. Современная классификация опухолей кроветворной ткани выделяет ALK-позитивную АККЛ в самостоятельное заболевание, и обнаружение t(2;5), наиболее частого варианта перестройки ALK при этой опухоли, подтверждает диагноз на генетическом уровне. Это существенно при разграничении АККЛ с лимфомой Ходжкина, периферическими Т-клеточными лимфомами без дополнительных уточнений и другими крупноклеточными опухолями, которые могут выглядеть сходно под микроскопом. Подтвержденный ALK-позитивный статус несет и прогностическую информацию: такие лимфомы в целом лучше отвечают на стандартную химиотерапию и имеют более благоприятное течение по сравнению с ALK-негативной АККЛ. Кроме того, постоянно активная киназа ALK служит мишенью для таргетных препаратов (ингибиторов ALK, например кризотиниба), поэтому результат учитывается при выборе тактики лечения рецидивных и устойчивых форм болезни.

При интерпретации учитывается, что t(2;5) охватывает большинство, но не все случаи ALK-позитивной АККЛ: у части пациентов ген ALK сливается с другими генами-партнерами. Если перестройка t(2;5) не обнаружена, а клиническая картина и экспрессия белка ALK в опухолевых клетках указывают на ALK-позитивную лимфому, вероятен альтернативный вариант перестройки ALK. Результат FISH поэтому оценивается вместе с морфологической картиной и иммуногистохимическими данными, прежде всего с экспрессией ALK и CD30, и только такое сопоставление позволяет окончательно отнести опухоль к конкретному варианту лимфомы. Достоверность исследования зависит от доли опухолевых клеток в образце: при скудном материале или выраженном некрозе перестройка может остаться невыявленной, что учитывается при отрицательном результате.