Относительная экспрессия BCR::ABL1 p190 (e1a2), количественная RQ-ПЦР

Исследование количественно определяет химерный транскрипт BCR::ABL1 e1a2, кодирующий белок p190, в клетках периферической крови. Он образуется вследствие транслокации t(9;22), при которой соединяются участки генов BCR и ABL1 и формируется филадельфийская хромосома. Химерный белок BCR::ABL1 обладает постоянной тирозинкиназной активностью и поддерживает рост, выживание и размножение патологического клеточного клона. Вариант p190/e1a2 наиболее характерен для Ph-положительного острого лимфобластного лейкоза, тогда как при хроническом миелоидном лейкозе он встречается редко, примерно у 1–2% пациентов; для большинства случаев ХМЛ типичны транскрипты e13a2 и e14a2, кодирующие p210. Результат отражает количество BCR::ABL1 p190 относительно контрольного транскрипта ABL1 и выражается в процентах. В лабораторном заключении также указываются количество копий ABL1 и BCR::ABL1 и достигнутая чувствительность исследования, что позволяет оценить пригодность образца и глубину количественного определения.

Клиническое значение

При BCR::ABL1-положительном остром лимфобластном лейкозе количественное определение p190 позволяет использовать этот транскрипт как индивидуальный молекулярный маркер опухолевого клона. Исходный уровень, установленный до или в начале лечения, становится точкой сравнения для последующих исследований: выраженное снижение относительной экспрессии соответствует уменьшению количества BCR::ABL1-положительных клеток, тогда как сохранение значимого уровня, недостаточное снижение или последующее нарастание транскрипта требует сопоставления с этапом терапии и другими признаками активности заболевания. Поскольку BCR::ABL1 одновременно является драйверным нарушением и терапевтической мишенью, его обнаружение связано с применением ингибиторов тирозинкиназ в лечении Ph-положительного ОЛЛ, а серийное количественное исследование позволяет оценивать молекулярную динамику опухолевого клона на фоне терапии. 
При редком p190-положительном варианте хронического миелоидного лейкоза тот же транскрипт используется для последовательного наблюдения за ответом на лечение. В этой ситуации важно применять тест, направленный именно на e1a2, поскольку стандартные исследования ХМЛ обычно ориентированы на более распространённые p210-транскрипты e13a2/e14a2. Для p190 не используют Международную шкалу BCR::ABL1 и стандартные пороги молекулярного ответа, разработанные для p210; динамику оценивают по изменению уровня e1a2 у конкретного пациента относительно его исходного значения и с учётом характеристик используемого количественного метода. 
Наибольшую информацию анализ даёт именно при повторных измерениях одного и того же транскрипта у одного пациента . Последовательное снижение BCR::ABL1 p190 позволяет проследить глубину молекулярного ответа, а повторное увеличение уровня после достигнутого снижения может указывать на расширение BCR::ABL1-положительного клона. При Ph-положительном ОЛЛ результат сопоставляют с исследованием костного мозга, иммунофенотипированием и другими методами оценки измеримой остаточной болезни, поскольку решение о состоянии ремиссии и дальнейшем лечении строится на совокупности данных. 
Если BCR::ABL1 p190 ранее был подтверждён , отсутствие определяемого транскрипта означает, что его уровень находится ниже чувствительности конкретного исследования и соответствует глубокому снижению молекулярно выявляемого клона. Если тип BCR::ABL1-транскрипта ранее не установлен, отрицательный результат по p190 не исключает BCR::ABL1-положительное заболевание, поскольку патологический клон может содержать p210 или другой редкий вариант транскрипта. Поэтому данный анализ особенно полезен для количественного наблюдения после того, как e1a2/p190 уже определён как основной молекулярный маркер заболевания.

Что влияет на результат

Количественный показатель зависит от числа BCR::ABL1-положительных клеток в периферической крови и этапа лечения, поэтому противоопухолевая терапия закономерно изменяет уровень транскрипта вместе с размером патологического клона. Для оценки динамики результаты сравнивают с предыдущими исследованиями того же варианта BCR::ABL1 и учитывают, выполнен анализ до лечения, на его фоне, после достижения ремиссии или при подозрении на прогрессирование. Исследование выполняется по РНК, поэтому её сохранность имеет принципиальное значение. Нарушение условий хранения и транспортировки крови, выраженное уменьшение количества клеток или недостаточное количество пригодной РНК могут снижать чувствительность анализа. Количество копий контрольного ABL1 позволяет оценить качество и достаточность материала для количественного определения; поэтому этот показатель указывается в заключении вместе с количеством BCR::ABL1 и чувствительностью метода.