Анализ относительной экспрессии гена BCR/ABL -количественная RQ ПЦР (ПЦР в реальном времени, колич.)

BCR/ABL (BCR-ABL1) является химерным геном, который образуется при обмене участками между 9-й и 22-й хромосомами. Укороченная 22-я хромосома, возникающая при этой транслокации, известна как филадельфийская хромосома. Слитный ген кодирует аномальную тирозинкиназу с постоянной, неконтролируемой активностью: она непрерывно передает сигналы к делению кроветворных клеток и подавляет их естественную гибель, что приводит к развитию опухоли крови. В норме гена BCR/ABL в клетках нет, поэтому его продукт (химерная матричная РНК) обнаруживается только у носителей опухолевого клона. Количественная ПЦР в реальном времени измеряет число копий транскрипта BCR/ABL в лейкоцитах крови относительно контрольного гена. Результат выражается в процентах и отражает долю опухолевых клеток в кроветворении: чем она выше, тем больше остаточная масса лейкозного клона. Метод улавливает одну опухолевую клетку среди десятков тысяч нормальных, поэтому фиксирует и минимальную остаточную болезнь, недоступную обычному микроскопическому исследованию.

Хронический миелолейкоз практически всегда связан с BCR/ABL, и количественное измерение транскрипта служит стандартом контроля лечения этого заболевания. Терапия ингибиторами тирозинкиназы (иматиниб и препараты последующих поколений) блокирует активность химерного белка, и опухолевый клон постепенно сокращается, что проявляется закономерным снижением уровня транскрипта в крови. Регулярное измерение позволяет объективно оценить глубину ответа по международной шкале: большим молекулярным ответом считается снижение уровня BCR/ABL до 0,1% и ниже, а еще более выраженное снижение обозначается как глубокий молекулярный ответ. Достижение этих рубежей в ожидаемые сроки подтверждает эффективность лечения, а стойкий глубокий ответ рассматривается как условие для обсуждения ремиссии без терапии. Слишком медленное снижение или рост показателя после достигнутого ответа указывает на утрату контроля над болезнью, в том числе из-за развития устойчивости опухолевого клона или пропусков приема препарата, и учитывается при пересмотре лечебной тактики.

У части пациентов с острым лимфобластным лейкозом также выявляется филадельфийская хромосома, и у них количественное определение BCR/ABL применяется для отслеживания минимальной остаточной болезни на фоне лечения. Динамика транскрипта в этом случае помогает оценить полноту ответа и вовремя распознать молекулярный рецидив, который опережает клинические проявления. При интерпретации имеет значение вариант химерного транскрипта: при хроническом миелолейкозе преобладает вариант p210, при остром лимфобластном лейкозе чаще встречается p190, поэтому результаты сопоставляются с исходно установленным у пациента типом перестройки. Для корректной оценки динамики измерения желательно выполнять по единой методике, поскольку сравниваются последовательные значения одного и того же показателя во времени.