Определение мутации BRAF V600E методом ПЦР в костном мозге

Мутация BRAF V600E представляет собой приобретённое генетическое изменение опухолевых B-лимфоцитов, характерное для классического волосатоклеточного лейкоза. Исследование методом ПЦР выявляет замену c.1799T>A, приводящую к изменению p.Val600Glu в белке BRAF, в ДНК клеток костного мозга. Мутантный белок сохраняет постоянную активность и поддерживает рост и выживание лейкозного клона. Волосатоклеточный лейкоз относится к зрелым B-клеточным новообразованиям и преимущественно поражает костный мозг, кровь и селезёнку. Название заболевания связано с характерными цитоплазматическими отростками опухолевых лимфоцитов. Инфильтрация костного мозга нарушает нормальное кроветворение и приводит к анемии, снижению числа нейтрофилов и тромбоцитов, повышенной восприимчивости к инфекциям и увеличению селезёнки. BRAF V600E выявляется в подавляющем большинстве случаев классического волосатоклеточного лейкоза и относится к его определяющим молекулярным признакам. Результат используют вместе с морфологическим исследованием костного мозга и иммунофенотипированием опухолевых B-клеток.

Клиническое значение

Обнаружение BRAF V600E подтверждает наличие молекулярного признака классического волосатоклеточного лейкоза. Исследование особенно значимо при небольшом количестве опухолевых клеток, стёртой морфологической картине и необходимости разграничить классический ВКЛ с другими зрелыми B-клеточными лимфопролиферативными заболеваниями, поражающими костный мозг и селезёнку. Диагностическое заключение формируется по совокупности морфологии, иммунофенотипа и молекулярного результата.
При рецидивирующем или рефрактерном волосатоклеточном лейкозе выявленная мутация устанавливает мишень для препаратов, подавляющих активность BRAF. Результат подтверждает молекулярное основание для BRAF-направленной терапии и учитывается при выборе лечения после оценки предшествующей терапии и клинического состояния пациента.
Результат «не обнаружено» означает отсутствие BRAF V600E в исследованном образце в пределах чувствительности ПЦР. Его оценивают вместе с морфологией и иммунофенотипом костного мозга, поскольку отрицательный результат возможен при низком содержании опухолевых клеток и в редких BRAF V600E-отрицательных случаях классического ВКЛ.

Что влияет на результат

Выявление мутации зависит от содержания опухолевых клеток в образце костного мозга. Небольшая опухолевая инфильтрация, выраженное разведение аспирата периферической кровью и снижение количества лейкозных клеток после лечения уменьшают долю мутантной ДНК. При её содержании ниже чувствительности ПЦР мутация остаётся невыявленной. Недостаточное количество клеточного материала и разрушение ДНК затрудняют исследование. Для анализа требуется аспират костного мозга, взятый в пробирку с ЭДТА и содержащий достаточное количество клеток.