Для врача 
Анализ мутаций в гене BRAF (V600E) (ПЦР, кач)
Информация об исследовании
Что такое Анализ мутаций в гене BRAF (V600E) (ПЦР, кач)
Анализ мутаций в гене BRAF (V600E) представляет собой молекулярно-генетическое исследование, направленное на выявление точечной замены нуклеотида в 600-м кодоне гена BRAF, при которой аминокислота валин замещается глутаминовой кислотой. Это наиболее частый вариант соматической мутации данного гена, обнаруживаемый в опухолевой ткани или биологических жидкостях пациента. Проще говоря, тест определяет конкретную «поломку» в гене, которая заставляет клетки делиться бесконтрольно. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) обеспечивает высокую чувствительность и специфичность: он позволяет обнаружить мутантную ДНК даже при её незначительном содержании в образце. Результат исследования является качественным — он фиксирует наличие или отсутствие мутации без количественной оценки мутантного аллеля.
Ген BRAF кодирует серин-треониновую протеинкиназу, которая является ключевым звеном сигнального пути RAS-RAF-MEK-ERK. В норме этот каскад регулирует клеточный рост, пролиферацию и дифференцировку. Мутация V600E приводит к конститутивной активации киназы BRAF, что означает постоянную передачу сигналов к делению независимо от внешних ростовых факторов. Именно этот механизм лежит в основе онкогенной трансформации при ряде злокачественных новообразований. Данная мутация встречается приблизительно у 40–60% пациентов с меланомой кожи, у значительной доли больных папиллярным раком щитовидной железы, а также при колоректальном раке, волосатоклеточном лейкозе и некоторых глиомах головного мозга.
Клиническое значение
Определение мутации BRAF V600E имеет принципиальное значение для персонализированной онкологической терапии. Обнаружение этой мутации при метастатической меланоме открывает возможность назначения таргетных ингибиторов BRAF (таких как вемурафениб и дабрафениб), которые избирательно блокируют мутантную протеинкиназу. Комбинация ингибиторов BRAF с ингибиторами MEK существенно повышает эффективность лечения и увеличивает безрецидивную выживаемость. Без предварительного молекулярного тестирования назначение такой терапии невозможно.
При колоректальном раке наличие мутации BRAF V600E служит неблагоприятным прогностическим маркером и одновременно предиктором резистентности к терапии ингибиторами рецептора эпидермального фактора роста (анти-EGFR препаратам). В диагностике рака щитовидной железы данная мутация помогает дифференцировать папиллярную карциному от доброкачественных узловых образований, что особенно ценно при неопределённых результатах цитологического исследования тонкоигольной аспирационной биопсии. Кроме того, анализ мутации BRAF используется для мониторинга ответа на лечение и раннего обнаружения рецидивов при динамическом наблюдении.
Ограничения метода
Качественный формат ПЦР-исследования позволяет надёжно установить сам факт присутствия мутации V600E, однако не определяет долю мутантных клеток в образце. Это означает, что при выраженной гетерогенности опухоли результат может зависеть от того, какой именно участок ткани был взят для анализа. Негативный результат не исключает наличия других, более редких мутаций в гене BRAF, таких как V600K, V600D или V600R, которые также могут иметь клиническое значение. В ряде случаев для полноценной молекулярной характеристики опухоли врач может рекомендовать расширенное генетическое тестирование методом секвенирования нового поколения (NGS).
Качество биоматериала играет критическую роль в достоверности результата. Длительная фиксация ткани в формалине, низкое содержание опухолевых клеток в образце или деградация ДНК способны привести к ложноотрицательному заключению. Важно понимать, что данный анализ выявляет соматические мутации, возникающие непосредственно в опухолевых клетках, и не предназначен для определения наследственной предрасположенности к онкологическим заболеваниям. Интерпретация результата всегда проводится лечащим врачом в совокупности с клинической картиной, данными гистологического исследования и другими молекулярными маркерами.
Когда назначают анализ
- Выявление мутации BRAF V600E при подтверждённой меланоме кожи для определения возможности назначения таргетной терапии ингибиторами BRAF
- Подбор персонализированной противоопухолевой терапии у пациентов с метастатической или нерезектабельной меланомой, когда анализ мутаций в гене BRAF определяет выбор лекарственного препарата
- Дифференциальная диагностика папиллярного рака щитовидной железы , при котором мутация BRAF V600E является одним из наиболее частых молекулярно-генетических нарушений и ассоциирована с более агрессивным течением
- Оценка прогноза при колоректальном раке — наличие мутации BRAF V600E связано с неблагоприятным прогнозом и резистентностью к терапии ингибиторами EGFR (рецептора эпидермального фактора роста)
- Уточнение молекулярного профиля опухоли при немелкоклеточном раке лёгкого для решения вопроса о назначении комбинированной таргетной терапии
- Определение онкологического риска и стратификация пациентов с гистологически подтверждёнными злокачественными новообразованиями, при которых статус гена BRAF влияет на тактику лечения
- Мониторинг эффективности таргетной терапии ингибиторами BRAF и MEK у пациентов с ранее выявленной мутацией V600E для своевременной коррекции схемы лечения
- Подозрение на волосатоклеточный лейкоз (редкая форма хронического лимфопролиферативного заболевания), при котором мутация BRAF V600E обнаруживается практически в 100% случаев и служит диагностическим маркером
- Исследование биопсийного материала при серозном раке яичников низкой степени злокачественности, когда анализ BRAF методом ПЦР помогает уточнить молекулярный подтип опухоли
- Дифференциальная диагностика доброкачественных и злокачественных узловых образований щитовидной железы по данным тонкоигольной аспирационной биопсии при неопределённых цитологических результатах
- Определение показаний к иммунотерапии при метастатическом колоректальном раке с микросателлитной стабильностью и одновременным наличием мутации BRAF V600E
- Прогностическая оценка агрессивности течения меланомы — качественное выявление мутации в гене BRAF позволяет стратифицировать пациентов по группам риска рецидива и метастазирования
- Молекулярно-генетическое исследование при болезни Эрдгейма — Честера и гистиоцитозе из клеток Лангерганса , при которых мутация BRAF V600E играет патогенетическую роль и определяет возможность назначения целенаправленной терапии
- Повторное тестирование BRAF при прогрессировании заболевания на фоне лечения для выявления возможных изменений молекулярного статуса опухоли и пересмотра терапевтической стратегии
Как подготовиться к анализу
Общие требования:
- Анализ на мутацию BRAF (V600E) выполняется методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и может проводиться на различных типах биоматериала: венозной крови, а также на образцах опухолевой ткани (биоптат, операционный материал), зафиксированных в формалине и залитых в парафин. Тип биоматериала определяет лечащий врач в зависимости от клинической ситуации.
- Если для исследования используется венозная кровь, забор проводится натощак, после периода голодания не менее 8 часов. Допускается пить чистую негазированную воду.
- Оптимальное время для сдачи крови — утренние часы, с 8:00 до 11:00.
- Если исследуется тканевой материал (парафиновые блоки или гистологические стёкла), специальной подготовки со стороны пациента не требуется. Материал передаётся в лабораторию в соответствии с рекомендациями врача.
Диета:
- При сдаче венозной крови за сутки до исследования рекомендуется исключить жирную и жареную пищу, а также алкогольные напитки. Это генетический тест, и характер питания не влияет непосредственно на определение мутации, однако качество сыворотки крови имеет значение для корректного выполнения анализа.
Лекарственные препараты:
- Приём лекарственных препаратов, как правило, не оказывает влияния на результат молекулярно-генетического исследования мутации BRAF. Тем не менее обязательно сообщите врачу обо всех принимаемых лекарствах, особенно если вы проходите курс противоопухолевой или таргетной терапии. Самостоятельно отменять назначенные препараты не следует.
Другие ограничения:
- За 30 минут до забора крови воздержитесь от курения.
- Накануне исследования желательно избегать значительных физических нагрузок и выраженного эмоционального напряжения.
- Непосредственно перед процедурой рекомендуется посидеть в спокойной обстановке 10–15 минут. Это позволит стабилизировать состояние организма и обеспечит качественный забор биоматериала.
Стоимость исследования
биоматериала 0 ₽