Анализ мутаций в 12 экзоне JAK2 гена методом ПЦР

Исследование выявляет приобретённые мутации в 12-м экзоне гена JAK2 в ДНК клеток крови. Экзон представляет собой участок гена, содержащий информацию для построения белка. Анализ выполняется методом ПЦР в качественном формате: в результате указывается, обнаружена мутация в исследуемой области или не обнаружена. Ген JAK2 кодирует янус-киназу 2 - внутриклеточный фермент, участвующий в регуляции кроветворения. При связывании эритропоэтина с рецептором на поверхности клеток-предшественников JAK2 передаёт сигнал, стимулирующий их созревание и образование эритроцитов. Активирующие мутации в 12-м экзоне поддерживают этот сигнальный путь в постоянно активном состоянии, вследствие чего в костном мозге формируется избыточная продукция клеток эритроидного ростка. Эти мутации возникают в одной из кроветворных стволовых клеток в течение жизни и передаются образованному ею клеточному клону. Они связаны преимущественно с истинной полицитемией - хроническим миелопролиферативным новообразованием, при котором повышается образование эритроцитов, увеличиваются гемоглобин и гематокрит, возрастает вязкость крови и риск сосудистых осложнений. У пациентов с мутациями 12-го экзона часто преобладает эритроцитоз, тогда как увеличение количества лейкоцитов и тромбоцитов может быть менее выраженным.

Клиническое значение

Исследование используют при стойком эритроцитозе и сохраняющемся подозрении на истинную полицитемию после отрицательного результата анализа мутации JAK2 V617F. JAK2 V617F выявляется у большинства пациентов с этим заболеванием, а мутации 12-го экзона обнаруживаются у небольшой части оставшихся случаев. Поэтому исследование 12-го экзона занимает определённое место в последовательной молекулярной диагностике истинной полицитемии и обычно не выполняется вместо первичного анализа JAK2 V617F.
Обнаружение мутации подтверждает наличие патологического клона кроветворных клеток и поддерживает диагноз истинной полицитемии. Мутация JAK2 V617F или мутация 12-го экзона входит в число основных молекулярных критериев заболевания. Для установления диагноза результат сопоставляют с уровнем гемоглобина и гематокрита, концентрацией эритропоэтина и морфологической картиной костного мозга. Такая совокупная оценка позволяет определить, соответствует ли выявленный клон полной диагностической картине истинной полицитемии.
Исследование помогает установить происхождение стойкого увеличения количества эритроцитов. При истинной полицитемии кроветворение усиливается вследствие приобретённой мутации в клетках костного мозга. Вторичный эритроцитоз развивается в ответ на хроническую гипоксию, заболевания лёгких или сердца, курение, пребывание на большой высоте, повышенную продукцию эритропоэтина и другие внешние стимулы. Выявление мутации 12-го экзона свидетельствует в пользу клонального миелопролиферативного процесса.
Отрицательный результат означает, что мутация в исследуемой области 12-го экзона применённым методом не выявлена. Он снижает вероятность истинной полицитемии, связанной с этим типом изменений, но оценивается вместе с результатом JAK2 V617F, уровнем эритропоэтина, показателями крови и данными исследования костного мозга. При выраженных признаках клонального эритроцитоза могут рассматриваться редкие изменения JAK2 в других участках гена.

Выявляемость мутации зависит от доли изменённых клеток в образце крови. При небольшом размере патологического клона количество мутантной ДНК может находиться ниже аналитической чувствительности ПЦР, что приводит к отрицательному результату. Исследование оценивает только заявленную область 12-го экзона и не определяет мутацию JAK2 V617F или изменения в других генах