ПЦР анализ клеща на бореллиоз (болезнь Лайма)

Анализ выявляет ДНК боррелий — возбудителей боррелиоза (болезни Лайма) — в материале клеща, снятого с кожи человека, методом ПЦР. Биоматериал — целый клещ или его фрагменты, доставленные в лабораторию в стерильной герметично закрытой ёмкости (например, в пробирке или флаконе с плотной крышкой) после извлечения из кожи. Результат выдаётся в формате обнаружено / не обнаружено.

Клещевой боррелиоз — самая распространённая клещевая инфекция в Европе и в России. Её возбудители — спирохеты комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, объединяющего несколько генотипов, клинически значимых для человека: B. burgdorferi sensu stricto, B. afzelii, B. garinii, реже встречающиеся виды. В разных регионах преобладают разные виды боррелий, что отчасти определяет клиническое разнообразие заболевания. 
Передача боррелий человеку происходит при присасывании инфицированного клеща — иксодового клеща видов Ixodes ricinus или Ixodes persulcatus. Боррелии находятся в кишечнике клеща и попадают в организм человека при кровососании. Существенная клиническая особенность боррелиоза — то, что для передачи возбудителя требуется относительно длительный период присасывания клеща (по разным данным, от 24 до 36 часов и более). Чем быстрее снят присосавшийся клещ, тем ниже риск передачи возбудителя. 
Клиническая картина боррелиоза разворачивается стадийно. Ранняя локализованная стадия — характерная мигрирующая эритема, развивающаяся через несколько дней или недель после присасывания клеща в виде кольцевидного покраснения с просветлением в центре, постепенно увеличивающегося в размерах. Эритема — наиболее специфичный клинический признак раннего боррелиоза, и при её типичной картине диагноз ставится клинически. Ранняя диссеминированная стадия может проявляться поражением суставов, нервной системы (менингитом, невритом черепных нервов, особенно лицевого), сердца. Поздняя стадия развивается через месяцы и годы после инфицирования у нелеченых пациентов и может включать хронические артриты, неврологические нарушения, кожные изменения. 
Диагностика боррелиоза у человека строится на сочетании клинической картины и серологических методов. Серологическое обследование (выявление антител к боррелиям с подтверждением методом иммуноблота) — основной лабораторный инструмент диагностики у человека на стадиях, когда уже сформировался иммунный ответ. Молекулярные методы исследования биоматериала пациента (крови, синовиальной жидкости, ликвора) применяются в специфических ситуациях по клиническим показаниям и имеют ограниченную чувствительность.

Исследование клеща — принципиально иная задача, чем диагностика инфекции у человека. Тест выявляет присутствие возбудителя в самом членистоногом, а не в организме укушенного. Это позволяет узнать, был ли снятый клещ инфицирован боррелиями, и тем самым оценить риск передачи возбудителя при присасывании. Положительный результат означает, что клещ был носителем боррелий, и присасывание создавало соответствующий риск инфицирования; отрицательный результат означает, что в исследованном клеще боррелии не обнаружены и риск передачи именно этой инфекции от него отсутствовал или был минимальным.

Метод ПЦР выявляет специфические участки генома Borrelia burgdorferi sensu lato в материале клеща. Метод не зависит от жизнеспособности возбудителя и обнаруживает ДНК как живых, так и погибших боррелий, что подходит для исследования снятого клеща независимо от его состояния (живого, повреждённого, неполного).

Клиническое значение

Исследование снятого клеща применяется для быстрой оценки риска инфицирования у человека после присасывания. Главное практическое значение теста определяется временным окном превентивных действий: профилактическая антибиотикотерапия после укуса инфицированного клеща в современных рекомендациях рассматривается прежде всего в первые 72 часа после присасывания. ПЦР клеща выполняется быстро — обычно в течение одного-двух рабочих дней — и успевает дать ответ в этом окне, делая возможным решение о превентивных мерах на основании конкретного эпидемиологического факта, а не только умозрительного риска.

После присасывания клеща пациенту следует как можно быстрее извлечь его (самостоятельно или в медицинской организации), сохранить целым или с минимальными повреждениями и доставить в лабораторию в герметично закрытой ёмкости в течение первых суток. Длительное хранение клеща в неподходящих условиях снижает чувствительность исследования. Для сохранения жизнеспособности клеща (что не обязательно, но желательно) в ёмкость можно поместить кусочек влажной ваты или травинку; при доставке погибшего клеща ДНК также сохраняется и доступна для исследования.

Положительный результат — указание на то, что клещ был носителем боррелий и присасывание создавало риск передачи возбудителя. После получения положительного результата пациенту следует обратиться к врачу — инфекционисту или терапевту — для решения вопроса о превентивной антибиотикотерапии в соответствии с действующими клиническими рекомендациями. Тактика определяется лечащим врачом с учётом длительности присасывания клеща, времени, прошедшего после извлечения, общего состояния пациента и эпидемиологической обстановки. Независимо от решения о превентивной терапии, пациенту необходимо клиническое наблюдение в течение нескольких недель после присасывания: за местом укуса (с появлением и динамикой возможной мигрирующей эритемы), за общим состоянием, за возможным появлением суставных, неврологических или сердечных симптомов. При появлении клинических признаков заболевания назначается серологическое обследование и соответствующая терапия.

Отрицательный результат означает, что в исследованном клеще боррелии не обнаружены и риск передачи боррелиоза именно от этого клеща отсутствовал или был минимальным. Превентивная антибиотикотерапия по поводу боррелиоза в этом случае не показана. При этом клиническое наблюдение за пациентом в течение нескольких недель после присасывания всё равно необходимо: клещ мог быть носителем других возбудителей, не выявляемых данным тестом — клещевого энцефалита, анаплазмоза, эрлихиоза, бабезиоза. При появлении клинических симптомов после укуса обследование продолжается с учётом всего возможного спектра клещевых инфекций. В эпидемически неблагополучных по клещевому энцефалиту регионах рассматривается вопрос об экстренной профилактике этой инфекции независимо от результата ПЦР клеща на боррелий.

Ограничения

Метод ПЦР выявляет ДНК возбудителя и не говорит о его жизнеспособности. Положительный результат на боррелий в клеще не равнозначен диагнозу боррелиоза у человека: он указывает на риск передачи возбудителя, но не подтверждает её. Решение о медицинской тактике после присасывания инфицированного клеща принимается лечащим врачом с учётом длительности присасывания, состояния пациента и эпидемиологических факторов. Отрицательный результат не отменяет необходимости медицинского наблюдения за человеком в течение нескольких недель после присасывания: помимо боррелий клещ может быть носителем других возбудителей, не выявляемых данным тестом. Тест направлен только на боррелий и не выявляет другие клещевые инфекции — клещевой энцефалит, анаплазмоз, эрлихиоз, бабезиоз; для их диагностики выполняются отдельные исследования материала клеща. Качество биоматериала имеет существенное значение: для исследования клещ должен быть доставлен целым или с минимальными повреждениями; при существенном разрушении клеща чувствительность метода может снижаться. Результат исследования требует интерпретации врачом — инфекционистом, терапевтом — с учётом длительности присасывания клеща, эпидемиологической обстановки в регионе, клинического состояния пациента, при необходимости с учётом результатов серологического обследования укушенного человека.