Анализ делеции TP53 гена (FISH, колич.), костный мозг

Исследование выявляет делецию участка 17p13, содержащего ген TP53, в клетках костного мозга и определяет долю клеток с этим хромосомным нарушением. Ген TP53 кодирует белок p53, участвующий в контроле клеточного цикла и удалении клеток с критическими повреждениями ДНК. Потеря одной копии TP53 ослабляет противоопухолевый контроль и может способствовать накоплению дополнительных генетических изменений, расширению патологического клона и формированию более устойчивого варианта заболевания. Костный мозг используют в тех случаях, когда необходимо исследовать патологический клеточный клон непосредственно в кроветворной ткани. Это особенно важно при множественной миеломе и лимфопролиферативных заболеваниях с выраженным поражением костного мозга, а также в ситуациях, когда опухолевые клетки недостаточно представлены в периферической крови. При хроническом лимфоцитарном лейкозе del(17p) часто можно определять по периферической крови, если в ней присутствует достаточное количество опухолевых лимфоцитов; костномозговой вариант позволяет исследовать тот же цитогенетический признак непосредственно в клетках аспирата.  
FISH выявляет именно потерю локуса TP53/17p13 на хромосомном уровне. Точечные мутации и другие изменения последовательности TP53 этим методом не определяются, поэтому при заболеваниях, где полный TP53-статус влияет на прогноз или лечение, FISH дополняют молекулярно-генетическим исследованием самого гена.

Клиническое значение

При хроническом лимфоцитарном лейкозе (ХЛЛ) делеция 17p относится к наиболее значимым генетическим изменениям опухолевого клона. Потеря участка, содержащего TP53, связана с неблагоприятной биологией заболевания и существенно влияет на чувствительность клеток к терапии. Поэтому del(17p) определяют при генетической характеристике ХЛЛ и учитывают при выборе лечения, особенно перед началом терапии и при необходимости новой линии после прогрессирования или рецидива. FISH на del(17p) оценивают совместно с молекулярным исследованием TP53 , поскольку у части пациентов патогенная мутация гена присутствует без делеции 17p и данным анализом не выявляется. Таким образом, положительный результат показывает наличие TP53-дефицитного цитогенетического клона, а отрицательный результат по FISH ещё не означает сохранного TP53-статуса в целом. 
При множественной миеломе делеция 17p/TP53 относится к ключевым цитогенетическим признакам высокого риска. Опухолевые плазматические клетки находятся преимущественно в костном мозге, поэтому именно костномозговый материал используется для исследования их цитогенетического профиля. Обнаружение del(17p) помогает определить биологическую группу заболевания и учитывается вместе с другими нарушениями, включая изменения 1q, 1p и перестройки IGH, при стратификации риска и выборе лечебной стратегии. В современных рекомендациях по миеломе del(17p) остаётся одним из основных неблагоприятных цитогенетических факторов; большое значение имеет и доля плазматического клона, несущего это изменение. 
При других лимфопролиферативных заболеваниях с поражением костного мозга потеря TP53 может сопровождать клональную эволюцию и формирование более сложного генетического профиля опухоли. Клинический смысл del(17p) при этом определяется конкретным заболеванием и сочетанием с другими цитогенетическими и молекулярными нарушениями. Исследование костного мозга позволяет оценить TP53-делецию именно в клеточной популяции, представленной в кроветворной ткани, что особенно важно при отсутствии достаточного количества патологических клеток в периферической крови.

Количественный FISH-результат показывает долю исследованных клеток костного мозга с del(17p) . Это позволяет определить представленность соответствующего цитогенетического клона в конкретном образце и выявлять ситуации, когда TP53-дефицитные клетки составляют только часть опухолевой популяции. Значение процента зависит от заболевания и состава исследованного материала, поэтому универсальной шкалы «низкого», «высокого» или «критического» риска только по доле FISH-положительных клеток не существует.

Что влияет на результат

Информативность исследования зависит от клеточности аспирата костного мозга, доли патологических клеток и представленности del(17p)-положительного клона. Разведение аспирата периферической кровью или небольшое количество опухолевых клеток может уменьшать долю ядер с выявляемой делецией и делать результат менее репрезентативным для патологического клона. При множественной миеломе особенно важно достаточное содержание опухолевых плазматических клеток, поскольку большое количество нормальных клеток костного мозга может снижать долю выявляемой аберрации; современные рекомендации по цитогенетике миеломы предусматривают исследование плазматических клеток с их выделением или обогащением, когда это технически возможно.  Предшествующая противоопухолевая терапия способна уменьшать размер патологического клона и изменять соотношение его субклонов, поэтому результат зависит от этапа заболевания и времени получения материала относительно лечения.