Анализ делеции гена TP53 (FISH, колич.), цельная кровь

Исследование выявляет делецию локуса TP53 в области 17p13.1 методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Ген TP53 кодирует белок p53, который участвует в контроле клеточного цикла и реакции клетки на повреждение ДНК, включая запуск восстановления генетического материала или программируемой гибели клетки при критических нарушениях. Потеря участка короткого плеча 17-й хромосомы, содержащего TP53, уменьшает число сохранных копий этого важного гена-супрессора и может способствовать выживанию патологического клеточного клона и его дальнейшей генетической эволюции. FISH проводится в интерфазных ядрах клеток цельной крови. Двухцветная проба одновременно оценивает локус TP53 и контрольный участок 17-й хромосомы, благодаря чему можно определить потерю TP53-содержащего участка и количественно рассчитать долю клеток с делецией. Результат показывает процент исследованных ядер, в которых обнаружена del(17p)/TP53, поэтому анализ позволяет установить наличие цитогенетически изменённого клона и оценить его представленность в конкретном образце крови. Именно делеция локуса TP53/17p13 является аберрацией, определяемой данным лабораторным исследованием.

Клиническое значение

При хроническом лимфоцитарном лейкозе (ХЛЛ) делеция 17p относится к наиболее значимым генетическим нарушениям опухолевого клона, поскольку потеря TP53 связана с неблагоприятной биологией заболевания и существенно влияет на чувствительность лейкозных клеток к терапии. Наличие del(17p) учитывается при выборе лечения наряду с патогенными вариантами последовательности TP53: при нарушениях этого гена традиционная химиоиммунотерапия обеспечивает значительно менее устойчивый контроль заболевания, поэтому современные схемы лечения строятся преимущественно на таргетных препаратах. Статус del(17p)/TP53 определяют перед началом терапии и повторно перед последующими линиями лечения, поскольку в ходе клональной эволюции заболевание может приобрести нарушение TP53, которого не было или которое находилось ниже уровня обнаружения при более раннем обследовании. 
FISH и молекулярно-генетическое исследование TP53 решают разные части одной клинической задачи . FISH определяет потерю участка 17p13.1, содержащего TP53, тогда как секвенирование выявляет патогенные изменения последовательности самого гена. У части пациентов мутация TP53 присутствует при сохранённом участке 17p и поэтому не определяется данным анализом, а при del(17p) оставшаяся копия TP53 также может содержать патогенный вариант. Поэтому при ХЛЛ результаты FISH на del(17p) и молекулярного анализа TP53 оцениваются совместно: такое сочетание позволяет врачу установить TP53-статус опухолевого клона, точнее определить генетический риск и использовать эту информацию при выборе терапии. 
Количественный результат показывает долю клеток с del(17p) среди исследованных ядер и позволяет определить, насколько широко данный цитогенетический клон представлен в образце. Это особенно важно при генетически неоднородном заболевании, когда клетки с делецией TP53 могут составлять только часть опухолевой популяции. При этом процент FISH-положительных клеток оценивается в контексте конкретного заболевания и не переводится в универсальные категории «низкого», «высокого» или «критического» риска только по величине показателя. При необходимости более чувствительного исследования небольших опухолевых субклонов применяют соответствующие молекулярно-генетические методы.

Делеция 17p/TP53 встречается и при других лимфоидных и миелоидных неоплазиях, где её значение определяется конкретным заболеванием и сочетанием с другими цитогенетическими и молекулярными нарушениями. Поскольку данная версия исследования выполняется по периферической крови , она наиболее информативна в ситуациях, когда патологические клетки присутствуют в кровотоке. Отрицательный результат означает, что del(17p) не обнаружена в исследованных клетках в пределах чувствительности FISH; при ХЛЛ такой результат не заменяет исследование мутаций TP53, поскольку патогенный вариант гена может присутствовать без хромосомной делеции.

Что влияет на результат

Информативность исследования зависит от количества опухолевых клеток в периферической крови и доли клеток с del(17p) в патологическом клоне. При небольшом количестве циркулирующих опухолевых клеток или наличии малочисленного субклона содержание клеток с делецией может оказаться ниже чувствительности FISH, поэтому результат сопоставляют с клеточным составом крови, этапом заболевания и другими данными онкогематологического обследования. Противоопухолевая терапия способна изменять размер и состав опухолевого клона, включая долю клеток с нарушением TP53. Поэтому для интерпретации количественного результата важно учитывать, выполнено исследование до начала лечения, перед новой линией терапии, на фоне лечения или при прогрессировании заболевания.